ICS 71.040.30 G 66 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 33411—2016 酶联免疫分析试剂盒通则 Guidelines for enzyme immunoassays kit 2016-12-30发布 2017-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T33411—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。 本标准起草单位：江苏省微生物研究所有限责任公司。 本标准主要起草人：宓晓黎、李利东、黄丽俊、袁建兴、杜姝莲 GB/T33411—2016 酶联免疫分析试剂盒通则 1范围 本标准规定了酶联免疫分析试剂盒的技术要求、检验方法、使用说明书和标签。 本标准适用于小分子化合物检测用的酶联免疫分析试剂盒。 2技术要求 2.1 试剂盒主要组成及要求 试剂盒由一整套试剂和材料组成，应严格按照其说明书的规定使用，并满足下列要求： 包被微孔板：在微孔板上包被相应的抗体或抗原； b) 抗体：可使用多克隆抗体或单克隆抗体； c) 系列标准溶液：定量检测用时，应配制至少5种浓度的标准溶液； d) 标记物：标记物可以是标记抗原或标记抗体；标记酶为辣根过氧化物酶或其他适宜标记的酶； e) 底物显色剂：过氧化氢溶液/四甲基联苯胺溶液或其他底物显色剂； f) 洗涤剂：磷酸盐缓冲溶液或其他缓冲溶液； 终止剂：硫酸溶液或其他溶液。 2.2 2外观 试剂盒外观完整，内装试剂齐全；包被抗原或抗体的微孔板透明干燥且用真空包装；液体组分应澄 清透明；冻干组分呈疏松体，经复溶后，其溶液应澄清，无异物。 2.3标准曲线线性 以标准溶液考察线性和范围。标准曲线为Y-In（X）等数学模型计算时，在试剂盒规定的标准浓度 范围内，其线性相关系数的绝对值应≥0.99。 2.4灵敏度 2.4.1检出限 一般用空白标准溶液（n≥10）测定均值加或减2倍标准差的值（。土2s）所对应的浓度表示检 出限。 2.4.2定量限 用空白标准溶液（n≥10）测定均值加或减3倍标准差的值（元。士3s）所对应的浓度表示定量限。且 定量限值应大于或等于标准曲线中最低浓度点值，满足一定的精密度和准确度的要求。 2.5精密度 2.5.1批内变异系数 在同一实验室，由同一操作员使用同一批次试剂盒，按相同测试方法，对同一被测试对象进行的 1 GB/T33411—2016 10次以上独立测试，验证测试结果之间的一致程度，其变异系数应不大于20%。 2.5.2批间变异系数 在不同实验室，由不同操作员使用不同批次试剂盒，按相同测试方法，对同一被测试对象进行的 10次以上独立测定，验证测试结果之间的一致程度，其变异系数应不大于25%。 2.6正确度 用标准品进行验证。在标准曲线范围内，选取3个不同浓度进行回收试验，所添加浓度应涵盖方法 测定低限浓度、方法测定最高浓度和关注浓度。对于已制定最高残留限量（MRL）的物质，关注浓度为 MRL；对于未制定MRL的物质，关注浓度为常见限量指标；对于禁用物质，关注浓度为两倍方法测定低 限。其回收率应在60%120%范围内。 3检验方法 3.1外观 目测法。 3.2 标准曲线的线性 标准曲线至少由5个浓度组成，每个浓度的至少重复测定3次，其均值作为该标准曲线的测定值 按产品使用说明书的程序操作，测定标准溶液的吸光度值或其他测定值。通过标准液浓度的吸光度值 绘制标准曲线。绘制Y-1n（X）标准曲线或其他规定的标准曲线 若以标准品百分吸光度比值为纵坐标，标准品浓度的半对数为横坐标绘制标准曲线， 按式（1）计算百分吸光度比值，按式（2）建立方程，并计算相关系数。 Y=B/B。X100% ..(1) Y=a+b·InX ....(2) 式中： Y 百分吸光度比值； B。 零浓度标准溶液的吸光度值； B 标准溶液吸光度值； X一一标准品浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； 截距； a b 斜率。 相关系数的计算：利用数据统计处理软件计算相关系数。 3.3灵敏度 取已包被好的微孔板，按产品使用说明书的程序操作，测定标准溶液的吸光度值。同时测定10份 零浓度标准溶液的吸收值，绘制标准曲线。 求出10份零浓度的吸收值的平均数（元。）和标准差（s），计算一2s（竞争抑制法试剂盒）或元。十2s （夹心法试剂盒），以此数值在标准曲线上计算或查出相对应的浓度，即为检出限。计算。一3或。十 3s，以此数值在标准曲线上计算或查出相对应的浓度，即为定量限。 3.4精密度 在同一次检测中，取已包被好的微孔板，加人系列浓度的标准溶液，重复10次，按产品使用说明书 2