ICS 65.020.20 CCS B 05 黑 龙 DB23 江 省 地 方 标 准 DB23/T 3 0 5 1—2021 溪荪组培繁殖技术规程 2021 - 12 - 24 发布 黑龙江省市场监督管理局 2022 - 01 - 23 实施 发 布 DB23/T 3 0 5 1—2021 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省林业和草原局提出。 本文件起草单位：东北林业大学、绥棱县国有林场三吉台林场、海伦市森林资源保护中心、国营明 水县明水林场。 本文件主要起草人：王玲、付海静、弓悦、孙振明、李诚、王磊、叶王斌、史恭发、闫蕾、吕汝彤、 赵蕊阳、刘桂伶、杨娟、裴艳春。 Ⅰ DB23/T 3 0 5 1—2021 溪荪组培繁殖技术规程 1 范围 本文件规定了溪荪（Iris sanguinea Donn. ex Horn.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配制、 培养条件、无菌苗培育、外植体获取和处理、愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、不定芽分化、生根培养、 炼苗、移栽和生产档案。 本文件适用于溪荪组培繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 环境与设备消毒 4.1 接种室消毒 接种室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.6 的规定执行。 4.2 培养室消毒 培养室消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.7 的规定执行。 4.3 超净工作台消毒 超净工作台消毒按 NY/T 2306—2013 中 8.5 和 8.6 的规定执行。 4.4 接种器具消毒 接种器具按 NY/T 2306—2013 中 8.4 的规定执行。 5 培养基配制 5.1 母液配制 培养基母液配制按 NY/T 2306—2013 中 7.3 的规定执行。 1 DB23/T 3 0 5 1—2021 5.2 培养基配制 5.2.1 培养基配方 培养基配制成分如下： a) 初代培养基为添加 30 g/L 蔗糖+3 g/L 琼脂粉的 MS 培养基，灭菌前培养基 pH 值调为 5.8； b) 继代培养基为添加 30 g/L 蔗糖的 MS 固体培养基，灭菌前培养基 pH 值调为 5.8～6.0； c) 愈伤组织诱导培养基为添加 6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖 30 g/L 的 MS 固体培养基，灭菌前培养基 pH 值调为 5.8～6.0； d) 愈伤组织增殖培养基为添加 6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+蔗糖 30 g/L 的 MS 固体培养基， 灭菌前培养基 pH 值调为 5.8～6.0； e) 分化培养基为添加 6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖 30 g/L 的 MS 固体培养基，灭菌前培养 基 pH 值调为 5.8～6.0； f) 生根培养基为添加 NAA 0.5 mg/L+活性炭 1.0 g/L+蔗糖 30 g/L 的 MS 固体培养基，灭菌前培 养基 pH 值调为 5.8～6.0。 5.2.2 培养基配制方法 培养基配制方法按 NY/T 2306—2013 中 7.4 的规定执行。 5.3 培养基灭菌及保存 培养基灭菌及保存方法按 LY/T 1882—2010 中 4.2 的规定进行。 6 培养条件 光照周期 14 h/d、光照强度 3000 Lux～5000 Lux，培养温度 24℃～26℃，空气相对湿度 60%～80%。 7 无菌苗培育 7.1 种子消毒 挑选颗粒饱满的种子，用稀释 50 倍的洗洁剂水溶液搅拌清洗后，流水冲洗干净，在室温下用初始 温度为 80 ℃的水浸泡种子 24 h，倒掉水后吸干。在超净工作台内，将种子用 75 %乙醇浸泡 30 s，无 菌水冲洗 3 遍～5 遍，再用 4％次氯酸钠水溶液浸泡并摇动 20 min，用无菌水冲洗 5 次并浸泡 10 min， 水倒掉后将种子放到滤纸上吸干备用。 7.2 无菌接种 消毒后的种子接入初代培养基上培养。 8 外植体获取和处理 种子萌发幼苗具 3 片～4 片叶时，在无菌条件下将根部剪掉，叶片保留 2.0 cm～3.0 cm 长，接种 到继代培养基中萌发根系，剪取带有二级须根的一级须根，切除二级须根后备用。 9 愈伤组织诱导 2 DB23/T 3 0 5 1—2021 将须根切至长度为 1.0 cm～1.5 cm，接入愈伤组织诱导培养基中培养。 10 愈伤组织增殖 从根段上切取黄色、颗粒明显的愈伤组织接入愈伤组织增殖培养基中。对产生内生菌的愈伤组织， 可转到添加了 100 mg/L 青霉素 G 钠的增殖培养基上培养。待内生菌消失后，再移回增殖培养基中。 11 不定芽分化 将增殖后的愈伤组织分割成直径 5 mm 的小块，接入分化培养基中培养。 12 生根培养 当不定芽高度≥3 cm 时，将不定芽单独切离下来，转入生根培养基中培养。 13 炼苗 当组培苗根系长度≥3 cm 时，打开组培瓶炼苗 3 d，炼苗期间应对叶表面喷洒自来水保湿。炼苗后 可在温室内移栽。 14 移栽 14.1 移栽准备 将高温消毒的草炭土与蛭石按照 1:1 的比例混合后装入 50 孔穴盘中，并将穴盘底部浸入水中至盆 中土壤湿润。 14.2 移栽 取出组培苗，用清水洗净基部培养基，修剪根，保留 2 cm，移栽至穴盘中，浇透水。 14.3 移栽后管理 移栽初期，保持空气湿度≥80%，适时浇水，保持基质湿润，温度控制在18℃～25℃，逐步增加光 照。在5月中旬～8月中旬可进行室外移栽，移栽后2周内保持土壤湿润。 15 生产档案 应建立生产档案，内容包括：环境与设备消毒、培养基配制、培养条件、无菌苗培育、外植体获取 和处理、愈伤组织诱导、愈伤组织增殖、不定芽分化、生根培养、炼苗和移栽等。 _______________________ 3