(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211117329.7 (22)申请日 2022.09.14 (71)申请人 广州中医药大学第三附属医院 地址 510000 广东省广州市荔湾区龙溪大 道261、 263号 (72)发明人 赵可伟　曹越　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 王艳斋 (51)Int.Cl. A61K 36/185(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 9/14(2006.01) A61P 19/08(2006.01) A61P 19/10(2006.01)A61P 19/02(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) C12N 5/0775(2010.01) C12N 5/077(2010.01) (54)发明名称 续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备预 防或治疗骨科疾病药物中的应用 (57)摘要 本发明涉及续断源性细胞外囊泡样纳米颗 粒的制药用途， 具体涉及续断源性细胞外囊泡样 纳米颗粒在制备预防或治疗骨科疾病药物中的 应用。 本发 明创造性地提取纯化中药续断衍生的 细胞外囊泡， 并对其生理功效进行了研究， 发现 其充分被骨髓间充质干细胞内化吸收， 能够通过 激活BMP2/Smads信号通路来促进骨髓间充质干 细胞的成骨分化， 促进骨髓间充质干细胞中的钙 结节形成， 促进成骨分化相关基因ALP、 OCN、 RUNX2以及COL1的表 达， 体内具有骨靶向性， 通过 灌胃给药可以缓解绝经后小鼠骨质疏松， 具有用 于制备预防或治疗骨科疾病的药物的潜力， 为预 防或治疗骨科疾病提供了新策略。 权利要求书1页 说明书9页 附图16页 CN 115414397 A 2022.12.02 CN 115414397 A 1.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备 预防或治疗骨科疾病药物中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 所述骨科疾病的类型包括骨质疏松、 骨折或骨性关节炎 中的任意 一种； 优选地， 所述药物的剂型包括片剂、 胶囊剂、 溶液剂、 气雾剂、 喷雾剂、 软膏剂或膜剂中 的任意一种； 优选地， 所述药物还 包括药学上可接受的辅料。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒是由 包括如下步骤的提取 方法制得的： (1)将续断原料榨汁， 过 滤， 滤液离心除去杂质后， 收集上清液； (2)将上清液超高速 离心后， 收集 沉淀， 过滤， 即得。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 步骤(1)所述离心包括至少三次离心； 优选地， 步骤(1)所述离心包括三次离心， 第一次离心的速度为100 ‑500g， 第二次离心 的速度为1000 ‑5000g， 第三次离心的速度为8000 ‑15000g， 且三次离心的时间各自独立地选 择5‑40min； 优选地， 步骤(2)所述超高速 离心的速度为10 0000‑200000g， 时间为5 0‑100min； 优选地， 步骤(2)所述过 滤选择0.2 2 μm滤膜进行。 5.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备骨靶向制剂中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述骨靶向制 剂还包括负载于所述续断源 性细胞外囊泡样纳米颗粒中的其 他预防或治疗骨科疾病的药物。 7.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备骨髓间充质干细胞成骨分化促进剂中的应 用。 8.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备骨髓间充质干细胞中钙结节形成促进剂中 的应用。 9.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备ALP蛋白表达促进剂和OCN蛋白表达促进剂 中的应用。 10.续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备BMP2/Smads信号 通路激动剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115414397 A 2续断源性 细胞外囊泡样纳米颗粒在制备 预防或治疗骨科疾病 药物中的应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 涉及续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒的制药用 途， 具体涉及续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备 预防或治疗骨科疾病药物中的应用。 背景技术 [0002]骨质疏松(osteoporosis， OP)是一种以骨量低下、 骨微结构损坏， 导致骨脆性增 加、 易发生骨折为特征的全身性骨病， 好 发于绝经后妇女及老年男性， 其 发病的主要原因之 一是骨形成和骨吸收之间的不平衡， 因此， 抑制破骨细胞过度 活化和增强成骨分化是抗骨 质疏松的有效策略。 [0003]续断为川续断科植物川续断Dipsacus  asper Wall.ex Henry的干燥根， 具有补肝 肾、 强筋骨、 续折伤的功效， 临床用于主治肝肾不足、 跌扑损伤、 筋伤骨折等。 细胞外囊泡 (extracellular  vesicles， EVs)含有多种蛋白质、 脂质和核酸， 可通过介导细胞与细胞之 间的通讯发挥重要的生理功能， 几乎所有类型的真核和原核细胞都分泌EVs。 植物EVs在形 态方面与哺乳动物EVs相 似， 但其组成和功能等方面研究较少。 有研究发现植物EVs是植物 先天免疫系统的组成成分， 具有抗真菌作用。 此外， 植物EVs具有跨物种调节功能， 不仅可以 调节哺乳动物细胞的生理功能， 还可以干预和预防疾病进程， 对疾病起到治疗作用。 这些研 究结论证明植物EVs作为一种新型 的天然产物有可能成为新药开发的良好候选来源。 中药 多为植物， 成本低， 副作用小， 但中药源性的EVs却很少有 人研究。 从中药续断中提取细胞外 囊泡是否可 行， 提取出的续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒 是否具有生物活性还未 可知。 [0004]因此， 如何提供一种从中药续断中提取细胞外囊泡的方法， 并深入研究提取到的 续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒 的功能， 以发掘其在治疗骨科疾病 方面的应用潜力， 是具 有意义的。 发明内容 [0005]针对现有技术的不足， 本发明的目的在于提供一种续断源性细胞外囊泡样纳 米颗 粒的制药用途， 具体涉及续断源性细胞外囊泡样纳米颗粒在制备预防或治疗骨科疾病药物 中的应用。 [0006]为达到此发明目的， 本发明采用以下技 术方案： [0007]第一方面， 本发明提供续断源性细胞外囊泡样纳 米颗粒在制备预防或治疗骨科疾 病的药物中的应用。 [0008]本发明创造性地提取纯化中药续断衍生的细胞外囊泡， 并对其生理功效进行了研 究， 发现其充分被骨髓 间充质干细胞内化吸收， 能够通过激活BMP2/Smads信号通路来促进 骨髓间充质干细胞的成骨分化， 促进骨髓间充质干细胞中的钙结节形成， 促进成骨分化相 关基因(ALP、 OCN、 RUNX2以及COL1)的表达， 具有体内骨靶向性， 其用于制备预防或治疗骨科 疾病的药物具有潜力， 为预防或治疗骨科疾病的方法提供了新的策略。说　明　书 1/9 页 3 CN 115414397 A 3