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(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211008762.7 (22)申请日 2022.08.22 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M202 2927 2022.06.20 (71)申请人 四川农业大 学 地址 625014 四川省雅 安市雨城区新康路 46号 (72)发明人 陈德芳 杨飞 张鑫 耿毅 黄小丽 欧阳萍 李志琼 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 专利代理师 肖柯岑 张娟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61K 35/744(2015.01)A61P 31/04(2006.01) C12R 1/46(2006.01) (54)发明名称 一种具有抗水生动物嗜水气单胞菌感染的 乳球菌及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种具有抗水生动物嗜水气 单 胞 菌 感 染 的 乳 球 菌 :蜜 袋 鼯 乳 球 菌 Lactococcus petauri JLlg08PX, 保藏于中国典 型培养物保藏中心(CCTCC), 保藏编号为CCTCC M 2022927。 该菌株耐酸、 耐胆盐, 具备在恶劣环境 的消化道中生存的能力。 本发明蜜袋鼯乳球菌 JLlg08PX不具有 致病性, 其共感染可 缓解由嗜水 气单胞菌引起的鲟肝脏和瓣肠的组织病理损伤, 降低嗜水气单胞菌感染后杂交鲟肝脏中气单胞 菌的载量, 并降低嗜水气单胞菌感染感染引起的 发病死亡率。 其无细胞上清液对鱼源致病菌嗜水 气单胞菌、 维氏气单胞菌和鲁氏耶尔森氏菌的生 长具有抑制作用; 在制备防治由嗜水气单胞菌引 起的鱼类败血症的微生态制剂中有潜在应用价 值。 权利要求书1页 说明书11页 附图6页 CN 115369059 A 2022.11.22 CN 115369059 A 1.一种蜜袋鼯乳球菌, 其特征在于, 它是保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC, 保藏 编号为CCTCC M 2022927的蜜袋鼯乳球菌Lactococ cus petauri JLlg08PX。 2.一种蜜袋鼯乳球菌的培养物, 其特征在于, 它是权利要求1所述的蜜袋鼯乳球菌在培 养基中培 养所得的产物。 3.如权利 要求2所述的培养物, 其特征在于, 所述培养基是TBS培养基或MRS培养基; 和/ 或所述培 养的条件是: 37℃培 养24h。 4.权利要求1所述的蜜袋鼯乳球菌和/或其培养物在制备抗水生动物致病菌的药物中 的用途。 5.如权利要求4所述的用途, 其特征在于, 所述蜜袋鼯乳球菌的培养物是权利要求2或3 所述的培 养物。 6.如权利要求4所述的用途, 其特征在于, 所述水生动物致病菌包括气单胞菌和/或鲁 氏耶尔森氏菌; 优选地, 所述气单 胞菌包括嗜水气单 胞菌和/或维氏气单 胞菌。 7.如权利要求4~6任一项所述的用途, 其特征在于, 所述药物是防治所述水生动物致 病菌感染导 致的疾病的药物; 优选地, 所述药物是防治水生动物败血症的药物。 8.如权利要求7所述的用途, 其特征在于, 所述药物是防治嗜水气单胞菌感染导致的水 生动物败 血症的药物; 优选地, 所述药物是降低水生动物肝脏中嗜水气单胞菌载量、 抑制嗜 水气单胞菌生长的药物。 9.如权利要求7所述的用途, 其特征在于, 所述水生动物败血症是鱼类败血症, 优选为 鲟鱼败血症。 10.如权利要求9所述的用途, 其特征在于, 所述鲟鱼包括中华鲟、 施氏鲟、 长江鲟、 西伯 利亚鲟和/或杂交鲟。权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 115369059 A 2一种具有抗水生动物嗜水气单胞菌感 染的乳球菌及其应用 技术领域 [0001]本发明属于益生菌领域, 具体涉及一种具有抗水生动物嗜水气单胞菌感染的乳球 菌及其应用。 背景技术 [0002]中国是世界第一大鲟鱼养殖国, 以西伯利亚鲟(Acipenser baerii)为母本繁育的 杂交鲟是当前西南地区鲟鱼产业的主要养殖品种。 在亲鱼的人工繁殖中, 手术后容易出现 细菌感染, 可引起30%左右的死亡率, 造成巨大经济损失, 直接影响西伯利亚鲟亲本的储备 和苗种的供给。 鲟败血症是一种典型 的细菌性疾病, 与气单胞菌属细菌感染有关。 据报道, 豚鼠气单胞菌感染可引起杂交鲟和达氏鳇(Huso dauricus)败血症。 维氏气单胞菌感染能 够引起中华鲟(A.sinensis)败血症。 嗜水气单胞菌感染可引起包括中华鲟、 施氏鲟 (A.schrenckii)和西伯利亚鲟败血症。 除单种细菌感染外, 混合感染也是水产养殖中常见 现象, 然而非致病菌株在混合感染病程发展中的作用和影响鲜有报道。 [0003]乳球菌为厚壁门 (Firmicutes) 、 芽孢杆菌纲(Bacilli) 、 乳杆菌目 (Lactobacillales)、 链球菌科(Streptococcac eae)乳球菌属(Lactococcus)的一类革兰氏 阳性无动力球形或卵圆细菌。 多年来, 乳球菌属的细菌被不断发现, 目前根据原核生物标准 命名列表(List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature,LPSN)数据库 收录信息和相关报道, 乳球菌属细菌共计23个种和6个亚种, 并且随着 乳球菌属细菌基因组 数据的不断丰富, 乳球菌属细菌的数量持续增 加, 相关分类研究也更为快捷。 [0004]目前, 乳球菌属细菌中既包括具有益生菌特性的种类, 例如 乳酸乳球菌、 中央乳球 菌; 同时, 也包括致病菌如格氏乳球菌。 尽管相关实验显示一些格氏乳球菌株具有益生的特 性, 但是主流研究仍认为格氏乳球菌是一种鱼类致病菌。 作为鱼类乳球菌病的主要病原, 格 氏乳球菌易感虹鳟, 在水温14℃以上疾病流行。 格氏乳球菌感染可引起 虹鳟全眼球炎、 心包 炎、 心外膜炎、 心肌 炎、 腹膜炎、 胃炎和肠炎 。 [0005]2017年Goodman等从有袋哺乳动物蜜袋鼯的面部脓肿灶中分离 获得一株过氧化氢 酶阴性的革兰氏阳性球菌, 通过形态学、 生理特性和系统发育 分析该菌株为乳球菌, 随后通 过16S rRNA和rpoB基因序列相似性以及ANI和dDDH分析确定该菌与格氏乳球菌不同种, 为 乳球菌新种, 命名为L.petaur i, 中文名译为蜜袋鼯乳球菌。 事实上, 蜜袋鼯乳球菌与格氏乳 球菌的亲缘关系近, 16S rRNA基因序列无法将其与格氏乳球菌区分开, 导致前期有许多菌 种鉴定不准确, 例如早在2007年, Savvidis等人就从希腊养殖场暴发的乳球菌病虹鳟体内 分离出一种菌, 早期鉴定为格氏乳球菌, 直到2020年经过全基因组测序分析才确定其鉴定 为蜜袋鼯乳球菌 。 [0006]蜜袋鼯乳球菌是一类最新发现的菌种, 现有报道的蜜袋鼯乳球菌菌株较少, 对其 功能研究也非常少, 其具有益 生或致病特性的研究更为 缺乏。说 明 书 1/11 页 3 CN 115369059 A 3
专利 一种具有抗水生动物嗜水气单胞菌感染的乳球菌及其应用
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