(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210654788.2 (22)申请日 2022.06.10 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.23679 2021.10.28 (71)申请人 四川中烟工业有限责任公司 地址 610000 四川省成 都市龙泉驿区国家 成都经济技术开 发区成龙大道龙泉段 2号 (72)发明人 张倩颖　李东亮　贾云　张娟　 蒋忠荣　李品鹤　郑天飞　王跃　 陈坚　李江华　 (74)专利代理 机构 四川省成 都市天策商标专利 事务所(有限合 伙) 51213 专利代理师 刘兴亮(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) A24B 15/20(2006.01) (54)发明名称 一种印度不动杆菌及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种印度不动杆菌及其用途， 本发明的印度不动杆菌Acinetobacter   indicusSCT ‑B2， 保藏于中国普通微生物菌种保 藏管理中心， 其 保藏编号为： CGMCC  NO.23679。 本 发明的菌株在生长过程中可以分解利用烟叶并 产生多种风味物质。 将该菌株的发酵液或菌体按 照烟叶重量的1～ 5％， 加入到含水量为20～40％ 的雪茄烟草中， 发酵 15～30天可以明显提升雪茄 烟叶的豆香香韵， 明显减少烟叶刺激性， 减少杂 气， 烟气柔和， 烟香增 加， 感官质量明显改善 。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114891694 A 2022.08.12 CN 114891694 A 1.一种印度不动杆菌Acinetobacter  indicus SCT‑B2， 保藏于中国普通微生物菌种保 藏管理中心， 其保藏编号 为： CGMCC NO.23679。 2.如权利要求1所述的一种印度不动杆菌， 其特征在于， 所述印度不动杆菌为革兰阴性 杆菌， 专性需氧， 多为球杆状、 常呈双排列， 或单个存在， 少数形成丝状和链状， 黏液型菌株 有荚膜， 无芽孢， 无鞭毛， 最 适生长温度为3 5℃。 3.如权利要求1 ‑2任一项所述的印度不动杆菌在微 生物培养、 烟叶发酵中的用途。 4.如权利要求1 ‑2任一项所述的一种印度不动杆菌的获取方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： (1)振荡洗脱烟叶上的微 生物， 离心收集 微生物； (2)将收集的微 生物复溶后加入荧 光染料cy5 ‑hydrazide， 在暗处染色； (3)差速离心分离微生物和未结合的染料， 先通过荧光显微镜检测菌株的染色情况， 然 后通过流式细胞仪将被荧 光标记的菌株分选 至装有YH培养基的96深孔板中进行培 养； (4)通过2， 4 ‑硝基苯肼测定培养基中醛酮化合物的含量， 再使用GC ‑MS鉴定产物的种 类， 所得的菌株即为印度不动杆菌Aci netobacter  indicus SCT‑B2。 5.如权利要求4所述的一种印度不动杆菌的获取方法， 其特征在于， 所述菌株的培养步 骤为： 平板培养： 蛋白胨10g， 酵母粉5g， 氯化钠10g， 琼脂15g， 蒸馏水1000mL， pH  7.0， 将冷冻 保存的甘油悬 液接种到平板上， 37℃恒温培 养24h； 摇瓶培养摇瓶培养： 葡萄糖30g， 蛋白胨20g， 酵母粉15g， K2HPO4.1.5g NaH2PO4 3g， 加蒸 馏水1000mL， 调pH值为7.0， 高压蒸汽灭菌； 摇瓶装液量为10～20％(v/v)， 接种量为2～5％ (v/v)， 培 养温度为3 0～35℃， 摇床转速为15 0～220rpm， 摇瓶培 养1～3天。 6.如权利要求 4‑5任一项所述的方法获取的菌株在微 生物培养、 烟叶发酵中的用途。 7.一种烟叶的发酵 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： A、 提供一种印度不动杆菌Acinetobacter  indicus SCT‑B2， 其保藏编号为： CGMCC   NO.23679； B、 将印度不动杆菌Acinetobacter  indicus SCT‑B2进行发酵培养， 获得发酵液及菌 体； C、 将步骤B所得的发酵液及菌体用水、 生理盐水或者其它缓冲液进行稀释， 稀释后菌液 浓度达到106～1012个菌/mL， 将菌液按照烟叶重量的1～5％， 加入到含 水量为20～50％的烟 叶中进行发酵， 发酵温度为3 0～50℃， 发酵时间15～3 0天。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891694 A 2一种印度不动杆菌及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及 烟草加工技 术领域， 尤其涉及一种印度不动杆菌及其用途。 背景技术 [0002]烟叶发酵是烟草加工过程中的重要环节 之一， 发酵的主要目的是促进烟叶化学成 分及物理性能的变化， 从而改善烟叶的内在品质， 提高烟叶的使用价值。 通过发酵处理， 可 使烟叶的青杂气减少， 刺激性降低， 烟叶特征香气 显露， 香气质变好、 香气量增加， 烟气由粗 糙变得细 腻， 吃味变得醇和， 可用性提高。 烟叶发酵过程主要 是主要由烟叶中的微生物群落 驱动。 然而， 这些过程漫长且不受控制。 现代人工发酵一直试图通过调整发酵条件或在自然 发酵群落中添加特殊配方 的发酵剂来控制过程。 采用外接微生物发酵技术， 可以缩短烟叶 发酵时间， 提高有效作业率， 可以赋予烟叶自然、 醇和芳香， 除去苦涩、 青杂气味， 谐调因含 氮过高而引起的辛辣味， 对提高烟叶品质有重要作用。 外加 微生物可能并不总是产生积极 的结果， 因为接种的微生物无法驱动群落向有利于产品发酵的方向进化。 主要原因是接种 微生物(外在)和天然微生物(内在)之间的微生物相互作用导致微生物群落的结构和功能 不完整。 微生物相互作用， 如共生、 协同、 捕食、 寄生和竞争， 可以极大地影响微生物群落的 代谢活动。 发明内容 [0003]本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种印度不动杆菌及其用途， 本发 明通过前期筛选的产香 微生物， 添加至 雪茄烟叶中进行强化发酵， 烟叶可用性明显提高。 [0004]本发明通过以下技 术方案来实现上述目的： [0005]本发明的第一个方面是提供一种印度不动杆菌Acinet obacter indicus SCT‑B2， 所述印度不动杆菌A cinetobacter  indicus SCT‑B2， 已于2 021年10月28日保藏在中国普通 微生物菌种保藏管理中心， 其简称为CGMCC， 保藏编号为CGMCC  NO.23679保藏地址： 北京市 朝阳区北辰西路1号院3号中国科 学院微生物研究所， 邮政编码10 0101。 [0006]所述印度不动杆菌为所述菌株为革兰阴性杆菌， 专性需氧， 多为球杆状、 常呈双排 列， 可单个存在， 有时形成丝状和链状， 黏液型菌株有荚膜， 无芽孢， 无鞭毛， 最适生长温度 为35℃。 [0007]本发明另一方面还提供了所述的印度不动杆菌在微生物培养、 烟叶发酵中的用 途。 [0008]本发明又一方面还提供了所述的一种印度不动杆菌的获取 方法， 包括以下步骤： [0009](1)振荡洗脱烟叶上的微 生物， 离心收集 微生物； [0010](2)将收集的微 生物复溶后加入荧 光染料cy5 ‑hydrazide， 在暗处染色； [0011](3)差速离心分离微生物和未结合的染料， 先通过荧光显微镜检测菌株 的染色情 况， 然后通过流式细胞仪将被荧光标记的菌株分选至装有YH培养基的96深孔板中进行培 养；说　明　书 1/4 页 3 CN 114891694 A 3