(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210646818.5 (22)申请日 2022.06.09 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.21471 2021.0 3.17 CGMCC NO.19900 2020.0 6.02 (71)申请人 山东五福生 生态工程有限公司 地址 251600 山东省济南市商河县殷巷镇 赵沙路8号 魁东工业园 (72)发明人 潘明　刘峰　王江伟　陈小奇　 李跃　郑百利　卞明刚　 (74)专利代理 机构 济宁众城专利事务所 3710 6 专利代理师 李效宁 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/14(2006.01)A01C 1/06(2006.01) A01N 63/38(2020.01) A01N 63/27(2020.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C12R 1/885(2006.01) (54)发明名称 一种复合 微生物拌种剂及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种复合微生物拌种剂及其 应用， 涉及农用微生物菌剂技术领域， 按照重量 百分比包含： 哈茨木霉孢子粉45％、 绿针假单胞 菌橙黄亚种2 501固体微生物 菌剂25％、 烷基苯磺 酸钠10％、 木质素磺酸盐15％， 膨润土5％。 本发 明不仅能够促进植物生长、 增强植物抗逆性， 还 能够有效防治 小麦根腐病。 权利要求书2页 说明书5页 CN 115197877 A 2022.10.18 CN 115197877 A 1.一种复合微生物拌种剂， 其特征在于， 按照重量百分比包含： 哈茨木霉孢子粉45％、 绿针假单胞菌橙黄亚种2501 固体微生物菌剂25％、 烷基苯磺酸钠10％、 木质素磺酸盐15％， 膨润土5％。 2.根据权利要求1所述的一种复合微生物拌种剂， 其特征在于： 所述哈茨木霉菌孢子粉 的制备， 具体过程如下： (1)摇瓶种子制备： 将保存于4℃冰箱的斜面菌种， 接种于液体摇瓶培养基， 30℃、 200rpm， 恒温震荡培 养48h。 摇瓶种子培养基： 葡萄糖： 2％， 酵母粉： 0.5％， 豆饼粉： 1.5％， 磷酸二氢钾： 0.3％， MgSO4.7H2O： 0.2％。 (2)将培养好的摇瓶种子培养基， 接种于一级种子发酵罐， 28 ‑30℃、 200rpm通风搅拌培 养24h， 通 风比1vvm。 培养基： 葡萄糖： 2％， 酵母粉： 0.5％， 豆饼粉： 1.5％， 磷酸二氢钾： 0.3％， MgSO4 ·7H2O： 0.2％。 (3)固体发酵： 将培养好的一级种子罐发酵液， 接种于固体发酵培养基， 25 ‑30℃， 培养 5‑7天。 固体发酵培养基： 麸皮42％， 稻壳57％， 硫酸铵0.5％， 磷酸氢二钾0.3％， 磷酸二氢钾 0.2％。 (4)烘干： 将发酵好的固体物料， 在45 ‑55℃的温度下， 烘干24h， 使物料水分降低的10％ 以下。 (5)筛分： 将烘干好的哈茨木霉固体物料， 用200目振动筛进行孢子和固体颗粒的分离， 得到哈茨木霉孢子粉。 3.根据权利要求1所述的一种复合微生物拌种剂， 其特征在于： 所述绿针假单胞菌橙黄 亚种2501固体微 生物菌剂的制备 方法， 具体过程如下： (1)将绿针假单胞菌橙黄亚种2501在固体培养基上活化， 培养温度为30 ±0.5℃， 培养 时间为48h， 制得活化的菌种。 固体培养基的组分如下： 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L， 氯化钠10g/L， 葡萄糖5g/L， 琼脂 18‑20g/L， 余 量水， pH值7.0 ‑7.2。 (2)将步骤(1 )活化的菌种接种于一级液体种子培养基中， 培养温度30 ±0.5℃， 转速 180‑200rpm， 培养时间20 ‑24h， 制得一级种子液。 培养基的组分如下： 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L， 氯化钠10g/L， 葡萄糖5g/L， 余量水， pH值7.0‑7.2。 (3)将步骤(2)制备的一级种子液接种于二级种子液体培养基 中， 接种量按体积分数计 为3‑5‰， 培养温度为30 ±0.5℃， 培养时间为12 ‑15h， 转速为200 ‑250rpm， 通气量为1.0 ‑ 1.2vvm， 制得二级种子液。 液体培养基的组分如下： 胰蛋白胨10g/L， 酵母粉5g/L， 氯化钠10g/L， 葡萄糖5g/L， 余量 水， pH值7.0 ‑7.2。 (4)将步骤(3)制备的二级种子液接种于三级种子液体培养基 中， 接种量按体积分数计 为5‑10％， 培养温度为30 ±0.5℃， 培养时间为6 ‑9h， 转速为150 ‑200rpm， 通气量为1.0 ‑ 1.2vvm， 制得三级种子液。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115197877 A 2液体培养基的组分按质量分数计如下： 胰豆粕0.2％， 玉米粉1％， 葡萄糖1％， 蛋白胨 0.5％， 硫酸镁0.1％、 硫酸铵0.1％， 磷酸二氢钾0.05％， 磷酸氢二钾0.05％， 余量水， pH值 7.2‑7.5。 (5)将步骤(4)制备的三级种子液， 接种于液体发酵培养基， 接种量按体积分数计为5 ‑ 10％， 培养温度为30 ±0.5℃， 培养时间为28 ‑32h， 转速为100 ‑150rpm， 通气量为0.8 ‑ 1.2vvm， 制得液体发酵物， 即为绿针假单 胞菌橙黄亚种25 01液体微 生物菌剂I。 液体发酵培养基的组分如下： 豆粕1％， 玉米粉3％， 葡萄糖1％， 蛋白胨0.5％， 硫酸镁 0.2％、 硫酸铵0.3％， 磷酸 二氢钾0.1％， 磷酸氢二钾0.1％， 余 量水， pH值7.2 ‑7.5。 (6)将步骤(5)制得的液体发酵物， 在进风温度130 ‑135℃， 出风温度70 ‑75℃条件下， 经 喷雾干燥塔进行干燥， 制得绿针假单 胞菌橙黄亚种25 01固体微 生物菌剂。 4.根据权利要求1所述的一种复合微生物拌种剂， 其特征在于： 所述复合微生物拌种剂 的加工过程， 将哈茨木霉孢子粉、 绿针假单胞菌橙黄亚种2501固体微生物菌剂放入研磨机 中进行研磨1min， 再将研磨后的哈茨木霉孢子粉、 绿针假单胞菌橙黄亚种2501固体微生物 菌剂以及烷基苯磺酸钠、 木质素磺酸盐、 膨润土加入搅拌机中， 混合均匀制得复合微生物拌 种剂。 5.一种如权利要求1 ‑4中任意一条所述的一种复合微生物拌种剂在防治小麦根腐病中 的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115197877 A 3