(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210586783.0 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 长春中医药大学 地址 130000 吉林省长 春市净月开发区博 硕路1035号 (72)发明人 李琼　闫宁　战宇　苗馨月　 陈长宝　 (74)专利代理 机构 深圳博敖专利代理事务所 (普通合伙) 44884 专利代理师 祝美娟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01) A01P 21/00(2006.01)C12R 1/12(2006.01) (54)发明名称 一种多粘芽孢杆菌及其微生物固体菌剂的 制备方法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种多粘芽孢杆菌及其微生 物固体菌剂的制备方法与应用， 该多粘芽孢杆菌 YN‑59(L)为从健康的人参根际土壤中分离、 纯 化、 筛选出的一株可有效拮抗多种人参病原真菌 的生防细菌。 本发明提供的多粘芽孢杆菌YN ‑59 (L)， 具有拮抗人参病原真菌和促生长能力， 对人 参尖孢镰刀菌、 毁灭柱孢菌、 腐皮镰孢菌、 立枯丝 核菌、 灰葡萄孢菌、 链格孢菌、 恶疫霉菌、 核盘菌 和强壮土赤壳等病原真菌有高效的拮抗作用； 此 外， 以其为原料制备的微生物固体菌剂， 能够预 防病原真菌， 绿色安全， 降低锈腐病发病率， 防治 效果明显并提高人参 生长质量。 权利要求书2页 说明书13页 附图3页 CN 114891684 A 2022.08.12 CN 114891684 A 1.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 其特征在于， 该多粘芽孢杆菌为从健康的人参根际土 壤中分离、 纯化、 筛 选出的一株有效拮抗人参病原真菌的生防细菌 。 2.根据权利 要求1所述的一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 其特征在于， 所述生防细菌为多 粘芽孢杆菌Baci lluspolymyxae。 3.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)在拮抗人参病原真菌中的应用， 其特征在于， 所述多粘 芽孢杆菌YN ‑59(L)为权利要求1或2所述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 所述病原真菌为人参尖 孢镰刀菌、 毁灭柱孢菌、 腐皮镰孢菌， 且 所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)对该病原真菌的抑菌率 大于等于89％。 4.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)在拮抗人参病原真菌中的应用， 其特征在于， 所述多粘 芽孢杆菌YN ‑59(L)为权利要求1或2所述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 所述病原真菌为人参立 枯丝核菌、 灰葡萄孢菌、 链格孢菌、 恶疫霉菌， 且所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)对该病原真菌 的抑菌率大于等于78％。 5.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)在拮抗人参病原真菌中的应用， 其特征在于， 所述多粘 芽孢杆菌YN ‑59(L)为权利要求1或2所述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 所述病原真菌为核盘菌 和强壮土赤壳， 且所述多粘芽孢杆菌 YN‑59(L)对该病原真菌的抑菌率大于等于72％。 6.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)在拮抗人参病原真菌中的应用， 其特征在于， 所述多粘 芽孢杆菌YN ‑59(L)为权利要求1或2所述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)， 且所述多粘芽孢杆菌 YN‑59(L)在含10 0mg/L色氨酸的Ki ng培养液中分泌吲哚乙酸的浓度为32.28mg/L。 7.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)制备的微生物固体菌剂， 其特征在于， 该微生物固体菌 剂以权利要求1或2所述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)为活性 成分， 且所述微生物固体菌剂包括 以下重量百分比的原料： 多粘芽孢杆菌 YN‑59(L)微生物菌液80～ 90％和蛭石10～ 20％。 8.一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)制备的微生物固体菌剂的制备方法， 用于权利要求7所 述的多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)制备的微生物 固体菌剂的制备， 其特征在于， 该微生物 固体菌 剂采用三级制种加喷雾 干燥技术制备得到， 包括以下步骤： S1、 将多粘芽孢杆菌 YN‑59(L)接种于种子 培养基中， 震荡培 养制成一级母种菌液； S2、 将一级母种菌液按照预设质量分数的接种量接种于发酵培养基中， 得到二级发酵 菌液； S3、 将二级发酵菌液按照预设质量分数的接种量接种于三级培养基进行扩繁培养， 得 到三级微 生物菌液； S4、 将三级微 生物菌液与吸附基质按比例混合， 进行喷雾 干燥， 得到微 生物固体菌剂。 9.根据权利 要求8所述的一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)制备的微生物固体菌剂的制备方 法， 其特征在于， 所述种子培养基包括以下重量分数的原料： 酵母膏5.0g、 蛋白胨10.0g、 氯 化钠10.0g及水1L； 所述发酵培养基包括以下重量分数的原料： 葡萄糖5.0g、 牛肉膏10.0g、 蛋白胨10.0g、 磷酸氢二钾1.0g、 氯化钠3.0g、 果胶10.0g及水1L； 所述二级培养基包括以下重量分数的原料： 牛肉膏10.0g、 蛋白胨5.0g、 磷酸氢二钾 1.0g、 果胶5.0g、 氯化钠3.0g及水1L； 所述种子培养基的pH为7.0～7.2， 所述发酵培养基 的pH为7.0～7.2， 所述三级培养基权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891684 A 2的pH为7.2 ～7.5； 所述振荡培养的温度为30℃～35℃， 所述发酵培养的温度为26℃～30℃， 所述扩繁培 养的温度为3 0℃～35℃， 所述喷雾 干燥中进风口温度为2 20℃， 出风口温度为80℃； 所述振荡培养的时间为1～4h， 所述发酵培养的时间为12h～30h， 所述扩繁培养的时间 为1.5h～2h； 所述吸附基质为蛭石， 所述扩繁培养中通气量为0.2～0.8L/dm2/min， 所述喷雾干燥为 离心喷雾 干燥。 10.根据权利要求8所述的一种多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)制备的微生物固体菌剂的制备 方法， 其特征在于， 所述一级母种菌液 的接种量采用质量分数为5％的接种量接种， 所述二 级发酵菌液的接种量采用质量分数为6 0％的接种量接种； 所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)的微生物固体菌剂的水含量为4％(W/W)， 所述多粘芽孢杆 菌YN‑59(L)的一级母种菌液活菌数不少于 1×105cfu/ml， 所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)的二 级发酵菌液活菌数不少于 1×109cfu/ml， 所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)的三级微生物菌液活 菌数不少于1 ×1010cfu/ml， 所述多粘芽孢杆菌YN ‑59(L)的微生物固体菌剂活菌数为50 × 108cfu/g。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891684 A 3