(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210945639.1 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 安徽农业大 学 地址 230036 安徽省合肥市长江西路13 0号 (72)发明人 王雅玲　汪维云　刘静　杨恩东　 (74)专利代理 机构 合肥兴东知识产权代理有限 公司 34148 专利代理师 叶曼 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12N 1/04(2006.01) A23K 10/30(2016.01) A23K 10/18(2016.01) C12R 1/25(2006.01) (54)发明名称 一种提高植物乳杆菌活性的方法及复合菌 剂的制备 (57)摘要 本发明提供了一种提高植物乳杆菌活性的 方法， 包括如下步骤： (1)黄芪水提物的制备； (2) 山楂水提物的制备； (3)白术水提物的制备； (4) 将获得的黄芪水提物、 山楂水提物和白术提取物 混合， 获得水提物混合溶液； (5)取植物乳杆菌接 种至MRS液体培养基中培养， 获得活化种子液； (6)在MRS液体培养基中加入活化种子 液， 再加入 3％～5％水提物混合溶液， 共培养。 本发明还提 供了一种复合菌剂的制备方法。 本发 明通过将黄 芪、 山楂、 白术添加于植物乳杆菌中共同培养来 显著提高植物乳杆菌的活性， 即生长繁殖能力和 耐酸耐胆盐的能力； 同时， 通过将混合溶液干燥 成粉与冻干的植物乳杆菌菌粉混合来制成复合 菌剂， 作为 一种绿色饲料添加剂。 权利要求书2页 说明书9页 附图5页 CN 115261276 A 2022.11.01 CN 115261276 A 1.一种提高植物乳杆菌活性的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将黄芪片与清水煮沸， 过滤获取第一次浸提液； 将过滤后的残渣与清水再次混合煮 沸， 过滤获取第二次浸提液； 将第一次和第二次获取的浸提液混合， 获得黄芪水提物； (2)将山楂片与清水煎煮， 过滤后再煎煮残渣两次， 过滤后合并三次煎煮液， 即为山楂 水提物； (3)向白术中加入清水， 浸泡过夜； 煎煮两次， 过滤后得原药液； 过夜， 隔日加无水乙醇， 醇沉过夜； 次日， 离心取 上清液； 回收乙醇， 获得白术水提物； (4)将获得的黄芪水提物、 山楂水提物和白术提取物按照1： 1： 1的比例混合， 获得水提 物混合溶 液； (5)用接种环划取植物乳杆菌， 将其接种至MRS液体培养基中， 并在39℃的培养箱中过 夜培养， 获得活化种子液； (6)在新鲜 的MRS液体培养基中加入1％的上述活化种子液， 再加入3％～5％的水提物 混合溶液， 在39℃温度下共培 养。 2.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中， 将 黄芪片与清水煮沸1h， 过滤获取第一次浸提液； 将过滤后的残渣与清水再次混合煮沸 30min， 过滤获取第二次浸提液； 将第一次和第二次获取的浸提液混合， 获得黄芪水提物。 3.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中， 将 山楂片与清水煎煮2h， 过滤后再煎煮残渣两次， 时间分别为1.5h、 1h， 过滤后合并三次煎煮 液， 即为山楂水提物。 4.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中， 向 白术中加入清水， 浸泡过夜； 煎煮两次， 每次30min， 过滤后得原药液； 4℃过夜， 隔日加无水 乙醇， 4℃醇沉过夜； 次日， 离心5mi n， 取上清液； 回收乙醇， 获得白术水提物。 5.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中， 黄 芪片与清水的质量比为1： 10， 用四层纱布过滤； 残渣与清水的质量比为1： 5； 第一次和第二 次浸提液混合后定容至 500mL； 所述步骤(2)中， 山楂片与清水的质量比为1： 10， 用四层纱布过滤； 残渣与清水的质量 比为1： 10； 合并三次煎煮液后定容至 500mL； 所述步骤(3)中， 白术片与清水的比例为1： 10， 用四层纱布过滤； 加入无水乙醇使溶液 中乙醇浓度为60％， 离心条件为4℃， 11000rpm/min； 利用旋转蒸发仪回收乙醇， 获得白术提 取物并定容至 500mL。 6.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(5)中， 用 接种环划取一环 斜面保藏的植物乳杆菌， 接种至100 mL MRS液体培养基中， 在39℃的培养箱 中过夜培 养。 7.根据权利要求1所述的提高植物乳杆菌活性的方法， 其特征在于， 所述步骤(6)中， 水 提物混合溶 液的具体添加量 为3％。 8.一种复合菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将黄芪片与清水煮沸， 过滤获取第一次浸提液； 将过滤后的残渣与清水再次混合煮 沸， 过滤获取第二次浸提液； 将第一次和第二次获取的浸提液混合， 获得黄芪水提物； (2)将山楂片与清水煎煮， 过滤后再煎煮残渣两次， 过滤后合并三次煎煮液， 即为山楂权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115261276 A 2水提物； (3)向白术中加入清水， 浸泡过夜； 煎煮两次， 过滤后得原药液； 过夜， 隔日加无水乙醇， 醇沉过夜； 次日， 离心取 上清液； 回收乙醇， 获得白术水提物； (4)将获得的黄芪水提物、 山楂水提物和白术提取物按照1： 1： 1的比例混合， 获得水提 物混合溶 液； 接着， 对水提物混合溶 液进行喷雾 干燥， 获得 水提物混合粉末； (5)用接种环划取植物乳杆菌， 将其接种至MRS液体培养基中， 并在39℃的培养箱中过 夜培养； (6)过夜培养结束后， 离心收集菌体， 并用无菌生理盐水洗涤若干次， 得到植物乳杆菌 菌泥； 在植物乳杆菌菌泥中添加保护剂， 预冻后置于冷冻干燥机中冻干； 冻干结束后， 研磨 成粉； (7)将步骤(4)获得的水提物混合粉末与步骤(6)获得的植物乳杆菌冻干粉进行混合， 即得目标 所需的复合菌剂。 9.根据权利要求8所述的复合菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中， 喷雾干燥 的条件为进风温度180℃， 蠕动泵速度7rpm/mi n。 10.根据权利要求8所述的复合菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(6)中， 过夜培 养结束后， 用高速冷冻离心机在20℃， 5000rpm/min条件下离心5min， 收集菌体， 并用无菌生 理盐水洗涤2次， 得到植物乳杆菌菌泥； 在植物乳杆菌菌泥中添加发酵液体积20％的保护 剂， 在‑80℃下预冻2h后置于 冷冻干燥机中冷冻干燥24～36h； 冻干结束后， 研磨成粉； 其中， 保护剂的组成为： 乳糖9.0 5g/100mL， 胰蛋白胨8.79g/10 0mL， 海藻糖1 1.21g/10 0mL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115261276 A 3