(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210592331.3 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 温州市康泰生物科技有限公司 地址 325100 浙江省温州市永嘉县瓯北镇 西岸工业区 (72)发明人 周红燕　刘恒慧　徐茜茜　唐运伟　 鲍显丹　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/46(2006.01) (54)发明名称 一种改良的链球 菌接种液 (57)摘要 本发明涉及微生物技术领域， 尤其涉及IPC   C12N1领域， 更具体地， 涉及一种改良的链 球菌接 种液。 通过对传统的接种液配方进行改良培， 能 够将原先生长微弱或不生长的链球菌在合理的 时间内培养出来， 大大提升接种液的培养能力， 同时对作用药物不存在协同或拮抗的影响。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115369052 A 2022.11.22 CN 115369052 A 1.一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 原料包括： 培养基、 裂解血、 动物血清和离子 添加剂； 所述离子添加剂为氯化钠、 硝酸钙、 硫酸锰、 硫酸镁、 磷酸氢钾、 氯化铁、 氯化锌、 硝 酸钠、 氯化铵、 柠檬酸铁、 氯化钾、 碳 酸氢钠中的一种或多种组成的水 溶液。 2.根据权利要求1所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述培养基为CAMHB 肉汤、 伊红美蓝琼脂、 Middle  Brook 7H10肉汤、 Middle  Brook 7H9琼脂、 MH肉汤、 龙胆紫血 液琼脂基础中的一种或多种。 3.根据权利要求1或2所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述裂解血为脱 纤维裂解绵羊血、 脱纤维裂解山羊血、 抗凝裂解小牛血、 抗凝裂解马血、 抗凝裂解驴血中的 一种或多种。 4.根据权利要求1所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述动物血清为鸡 血 清、 胎牛血清、 小牛 血清、 新生牛血清、 成牛 血清、 兔血清、 猪血清、 马血清中的一种或多种。 5.根据权利要求1 ‑4任一项所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述离子添 加剂为氯化钠、 硝酸钙、 硫酸镁、 磷酸氢钾、 氯化铁组成的水 溶液。 6.根据权利要求5所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述离子添加剂中氯 化钠、 硝酸钙、 硫酸镁、 磷酸氢钾、 氯化铁的总浓度为0.1 ‑5g/L。 7.根据权利要求5或6所述的一种改良的链球菌接种液， 其特征在于， 所述离子添加剂 中氯化钠、 硝 酸钙、 硫酸镁、 磷酸氢钾、 氯化铁的重量比为1： (0.1 ‑0.5)： (0.5 ‑1)： (0.5‑1)： (0.1‑0.2)。 8.一种根据权利要求1 ‑7任一项所述的改良的链球菌接种液的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： S1、 称取培养基20 ‑30g， 加入去离子水1L， 加热至30 ‑50℃搅拌5 ‑10min使其溶解后， 得 到培养基溶液并分装三角瓶； S2、 将步骤S1三角瓶中液体升温至110 ‑140℃， 高温灭菌5 ‑20min后， 冷却至50℃以下， 加入裂解血、 动物血清和离 子添加剂， 搅拌1 ‑10min后分装无菌试 管， 即得。 9.根据权利要求8所述的一种改良的链球菌接种液的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 S2中裂解血的加入量 为培养基溶液的2.5‑5wt％。 10.根据权利要求8 或9所述的一种改良的链球菌接种液的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S2中裂解血、 动物血清和离 子添加剂的重量比为(1 ‑8)： (2‑10)： 1。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369052 A 2一种改良的链球菌接种液 技术领域 [0001]本发明涉及微生物技术领域， 尤其涉及IPCC 12N1领域， 更具体地， 涉及一种改良的 链球菌接种液。 背景技术 [0002]药敏接种培养液主要是在体外药物敏感性试验中使用， 起增菌培养功能。 添加了 2.5～5wt％的裂解马血的链球菌接种液作为传统的配方， 用于链球菌的体外药敏， 虽然可 以解决大部分链球菌生长问题， 如A群链球菌、 B群链球菌、 肺炎链球菌等， 但仍存在部分营 养要求更苛刻的链球菌如草绿色链球菌中的星座链球菌、 中间链球菌、 唾液链球菌等出现 生长微弱， 甚至不 生长的情况。 影响了临床上对这类样本的药 敏试验。 [0003]现有技术中， 申请公开号为CN  104195216A的专利文件， 公开了一种KF链球菌琼脂 培养基及其应用， 所述培养基制备方法简单， 成本低， 且对粪性链球菌的生长有促进作用， 但是对星座链球菌、 中间链球菌、 唾液链球菌等苛养 菌的生长影响较小。 [0004]申请公开号为CN  104651468A的专利文件， 公开了一种匹克氏肉汤基础培养基及 其应用， 该专利能够提高溶血性链球菌的生存和增殖， 但是对于星座链球菌、 中间链球菌、 唾液链球菌等苛养型链球菌的生存无明显促进作用。 [0005]因此， 需要发明一种改良的链球菌接种液， 提升接种液的培养能力的同时， 对作用 药物不存在协同或拮抗的影响， 且稳定性高， 批间差异小。 发明内容 [0006]为了解决上述问题， 本发明第一方面提供了一种改良的链球菌接种液， 其特征在 于， 原料包括： 培 养基、 裂解血、 动物血清和离 子添加剂。 [0007]优选的， 所述培养基为CAMHB肉汤、 伊红美蓝琼脂(EMB)、  Middle Brook 7H10肉 汤、 Middle  Brook 7H9琼脂、 MH肉汤(MHB)、 龙胆紫血液琼脂基础中的一种或多种； 进一步优 选的， 为CAM HB 肉汤。 [0008]申请人意外 发现， 选用CAMHB肉汤作为培养基， 不仅能够促进链球菌接种液对草绿 色链球菌的生长， 还能提高接种液的稳定性。 这可能是由于CAMHB肉汤中含有适量牛肉浸 粉、 酸水解酪蛋白、 可溶性淀粉等物质， 为链球菌的生长提供了充足的碳源和氮源， 此外   CAMHB肉汤中还有微量的氯化钙， 能够与体系中其他成分协同作用提高接种液的稳定性和 批间重复性， 但是细胞在单纯 的培养基中是不能存活的， 需要加入一定量的营养物质和生 长因子， 细胞才能得以存活并且增殖。 [0009]优选的， 所述裂解血为脱纤维裂解绵羊血、 脱纤维裂解山羊血、 抗凝裂解小牛血、 抗凝裂解马血、 抗凝裂解驴血中的一种或多种； 进一 步优选的， 为 抗凝裂解马血。 [0010]优选的， 所述动物血清为鸡血清、 胎牛血清、 小牛血清、 新生牛血清、 成牛血清、 兔 血清、 猪血清、 马血清中的一种或多种； 进一 步优选的， 为胎牛 血清。 [0011]在一些优选 的方案中， 选用胎牛血清作为动物血清能够促进星座链球菌、 中间链说　明　书 1/8 页 3 CN 115369052 A 3