(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211052795.1 (22)申请日 2022.08.31 (71)申请人 天津瑞普生物技 术股份有限公司 地址 300308 天津市滨 海新区自贸试验区 （空港经济区） 东九道1号 (72)发明人 王显兵　李守军　车艳杰　吕茂杰　 范莉莉　夏颖　刘海霞　 (74)专利代理 机构 天津合正知识产权代理有限 公司 12229 专利代理师 马云云 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12R 1/35(2006.01) (54)发明名称 一种猪鼻支 原体培养基 (57)摘要 本发明提供了一种猪鼻支原体培养基及其 制备方法， 培养基的组分包 括MEM维生素溶液500 ～900ml， PPLO肉汤粉3～10g， 水解乳蛋白0～5g， 无水葡萄糖0～10g， N ‑乙酰神经氨酸0.1～1g， 酪 蛋白氨基酸水解物2～5g。 本发明还提供了一种 猪鼻支原 体培养基的制备方法， 培养基中血清添 加量由15％降至5％， 并简化了培养基配制流程， 可以保证在不影 响活菌数得情况下， 将猪鼻支原 体总蛋白含量提升3～5倍， 本发明获得的高纯度 猪鼻支原体灭活抗原， 可直接用于疫苗制备。 权利要求书1页 说明书12页 CN 115181709 A 2022.10.14 CN 115181709 A 1.一种猪鼻支原体培养基， 其特征在于， 所述培养基的组分包括MEM维生素溶液， PPLO 肉汤粉， 水解乳蛋白， 无 水葡萄糖， N ‑乙酰神经氨酸， 酪蛋白氨基酸水解物。 2.根据权利要求1所述猪鼻支原体培养基， 其特征在于， 所述培养基的组分包括MEM维 生素溶液500～900ml， PPLO肉汤 粉3～10g， 水解乳蛋白0～5g， 无水葡萄糖0～10g， N ‑乙酰神 经氨酸0.1～1g， 酪蛋白氨基酸水解物 2～5g。 3.根据权利要求2所述猪鼻支原体培养基， 其特征在于， 所述培养基的组分包括MEM维 生素溶液900ml， PPLO肉汤粉3g， 无水葡萄糖5g， N ‑乙酰神经氨酸0.3g， 酪蛋白氨基酸水解物 3g。 4.根据权利要求1～3所述猪鼻支原体培养基， 其特征在于， 所述培养基还需加入5％～ 15％的猪血清。 5.根据权利要求1所述猪鼻支 原体培养基， 其特 征在于， 所述培 养基的制备 方法为： 1)称取PPLO肉汤粉3g， 无水葡萄糖5g， N ‑乙酰神经氨酸0.3g， 酪蛋白氨基酸水解物3g， 溶解于10 0ml注射用水中， 配制成基础营养液； 2)加入900ml  1×MEM维生素溶液混合， 用1mol/L  NaOH溶液调节pH值至7.5 ±0.2， 再用 0.22 μm滤器过 滤除菌， 2 ‑8℃保存； 3)按5％～15％(v/v)比例向基础培养液中添加灭活补体的无菌猪血清， 配制成完全培 养基。 6.一种采用权利要求5制备 方法的猪鼻支 原体发酵培 养工艺。 7.根据权利要求5所述的猪鼻支原体发酵培养工艺， 其特征在于， 所述发酵培养工艺采 用发酵罐培养， 培养基总量为发酵罐容积的60～70％， 溶氧控制在20％ ±5％， 搅拌转速100 ～150r/min， 溶氧与转速级联控制， 发酵培 养总时间不超过48h 。 8.根据权利要求5所述的猪鼻支原体发酵培养工艺， 其特征在于， 所述发酵培养工艺采 用发酵罐培养， 所述发酵 罐的搅拌桨为 三叶扇形搅拌桨。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115181709 A 2一种猪鼻支原体培养基 技术领域 [0001]本发明属于兽用生物制品领域， 具体涉及一种猪鼻支 原体培养基。 背景技术 [0002]猪鼻支原体(Mycoplasma  hyorhinis， Mhr)是引发猪多发性浆膜炎(心包炎、 胸膜 炎、 腹膜炎等)和关节炎的主要病原之一， 猪鼻支原体通常感染3～10周龄左右的猪， 但对7 周龄左右的猪感染力最强， 可使猪只出现精神沉郁、 被毛粗乱、 咳嗽、 腹式呼吸、 跛行、 关节 肿胀等临床症状， 引发严重的多发性浆膜炎和多发性关节炎， 导致保育猪生长迟缓、 饲料转 化率降低， 对生猪养殖造成较大经济损失。 猪鼻支原体感染后会增加猪圆环病毒2型、 猪繁 殖与呼吸综合征病毒发病的严重程度， 并干扰 猪肺炎支 原体的分离 。 [0003]目前多使用KM2培养基、 A26培养基、 支原体液体培养基等培养猪鼻支原体， 但 上述 培养基配制过程繁琐， 添加成分比较多， 血清用量一般在20％～30％， 并且猪鼻支原体总蛋 白产量较低， 每升猪鼻支原体培养物含猪鼻支原体总蛋白约为20～ 40mg， 经济成本较高， 不 适于在大规模生产中使用。 因此， 开发一种高效， 操作简单， 适于大规模生产的猪鼻支原体 培养基对于猪鼻支 原体疫苗研发和相关疾病预防具有重要意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供了一种猪鼻支 原体培养基。 [0005]本发明的目的还在于提供了一种猪鼻支 原体培养基的制备 方法。 [0006]本发明的目的还在于提供了一种高效的猪鼻支原体的培养工艺， 可使活菌数达到 7.15×1010CCU50/ml， 猪鼻支 原体总蛋白产量能达 到60～120mg/L。 [0007]为实现以上技 术目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]一种猪鼻支原体培养基， 所述培养基的组分包括MEM维生素溶液， PPLO肉汤粉， 水 解乳蛋白， 无 水葡萄糖， N ‑乙酰神经氨酸， 酪蛋白氨基酸水解物。 [0009]所述培养基的组分包括MEM维生素溶液500～900ml， PPLO肉汤粉3～10g， 水解乳蛋 白0～5g， 无 水葡萄糖0～10g， N ‑乙酰神经氨酸0.1～1g， 酪蛋白氨基酸水解物 2～5g。 [0010]所述培养基的组分包括MEM维生素溶液900ml， PPLO肉汤粉3g， 无水葡萄糖5g， N ‑乙 酰神经氨酸0.3g， 酪蛋白氨基酸水解物3g。 [0011]所述培养基还需加入5％～15％的猪血清。 [0012]所述培养基的制备 方法为： [0013]1)称取PPLO肉汤粉3g， 无水葡萄糖5g， N ‑乙酰神经氨酸0.3g， 酪蛋白氨基酸水解物 3g， 溶解于10 0ml注射用水中， 配制成基础营养液； [0014]2)加入900 ml 1×MEM维生素溶液混合， 用1mol/L  NaOH溶液调节pH值至7.5 ±0.2， 再用0.22 μm滤器过 滤除菌， 2 ‑8℃保存。 [0015]3)按5％～15％(v/v)比例向基础培养液中添加灭活补 体的无菌猪血清， 配制成完 全培养基。说　明　书 1/12 页 3 CN 115181709 A 3