(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211090059.5 (22)申请日 2022.09.07 (71)申请人 湖北师范大学 地址 435002 湖北省黄石市磁湖路1 1号 (72)发明人 金艳霞　张月洋　孙慧　蔡颖　 李子涵　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 卢旺 (51)Int.Cl. A61K 47/64(2017.01) A61K 33/04(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 11/00(2006.01) (54)发明名称 一种凝集素修饰的纳米硒复合物材料的制 备方法和应用 (57)摘要 本发明首先公开了一种凝集素修饰的纳米 硒复合物材料的制备方法， 包 括将AANL与亚硒酸 钠混匀进行第一次孵育、 与抗坏血酸混匀进行第 二次孵育、 包被、 离心弃上清、 重悬、 洗涤等步骤； 本发明还公开了所述复合物材料在糖结合尤其 是细胞凝集和/或在抗氧化和/或在制备抑制肺 癌细胞增殖的药物方面的应用。 本发 明方法成本 低、 环保、 效率高、 制备方法简单、 所需设备简单， 易于推广， 提供的复合物分散性好、 更稳定、 生物 相容性和溶解性好、 应用效果显著， 能作为糖工 具更好用于糖生物学领域； 生物活性更好、 抗氧 化活性和抑制肺癌细胞增殖能力很强， 在生物医 学领域具有很好 地应用前 景。 权利要求书1页 说明书6页 附图5页 CN 115487311 A 2022.12.20 CN 115487311 A 1.一种凝集素修饰的纳米硒复合物材 料的制备 方法， 其特 征在于包括如下步骤： 1)称取冻干的凝集素A ANL溶于亚硒酸钠溶 液中， 旋转混匀， 进行第一次孵 育； 2)加入抗坏血酸溶 液， 旋转混合第二次孵 育， 包被； 3)第二次敷育后离心， 弃上清得到沉淀， 再将沉淀用0.01MPBS重悬， 洗涤2次， 即得到所 述凝集素修饰的纳米硒复合物材 料AANL‑SeNPs。 2.如权利要求1所述的一种凝集素修饰的纳米硒复合物材 料的制备 方法， 其特 征在于： 步骤1)中所述凝集素AANL与亚硒酸钠的比例关系为AANL： 亚硒酸钠＝10mg： 0.25mmol， 旋转混匀操作的条件为25℃、 5rpm， 第一次孵 育30min； 步骤2)中所述加入抗坏血酸溶液的体积为步骤1)中所述亚硒酸钠溶液体积的5倍， 抗 坏血酸与亚硒酸钠 摩尔比为 4:1； 第二次孵 育条件为25℃、 5rpm， 包被时长为12h； 步骤3)中所述离心为120 00rpm、 4mi n。 3.如权利要求2所述的凝集素修饰的纳米硒复合物材料在细胞凝集和/或在抗氧化和/ 或在制备抑制肺癌细胞增殖的药物方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115487311 A 2一种凝集素修饰的纳米硒复合物材料的制备方 法和应用 【技术领域】 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 具体涉及 一种凝集素修饰的纳 米硒复合物材料的 制备方法和应用。 【背景技术】 [0002]凝集素是能够特异性识别细胞膜表面或者细胞外基质中蛋白质、 脂质上碳水化合 物的一类蛋白质， 具有细胞识别、 抗细菌、 抗病毒感染、 免疫调节活性和抗肿瘤等多种生物 学功能。 不同的凝集素通过其特异 性的糖识别结构域来识别并结合不同糖基化修饰的蛋白 质或脂质。 肿瘤细胞表面的糖基化修饰相对于正常细胞发生了显著的异常， 而凝集素主要 通过识别肿瘤细胞表面的糖复合物或者通过其免疫调节活性来抑制肿瘤细胞的增殖。 因 此， 凝集素逐渐成为抗肿瘤药物筛选研究的热点， 如从Praecitrullus  fistulosus来源的 凝集素PFL通过caspase ‑3依赖性途径改变凋亡蛋白的表达来诱导肿瘤细胞的凋亡， 延长荷 瘤小鼠生存时间； 三七块茎凝集素KRL能有效抑制结肠癌细胞的增殖； 从黄秋葵中提取的凝 集素通过介导caspase途径诱 导人U87胶质瘤 细胞凋亡， 抑制胶质瘤 细胞增殖。 [0003]茶树菇凝集素AANL(Agrocybe  aegerita  lectin 2)是从茶树菇中鉴定的分子量 为43.175kDa的凝集素， 可在体外诱导肝癌细胞凋亡， 在体内能抑制荷瘤 小鼠肝癌细胞的生 长。 AANL有六个碳水化合物结合区域， 能高度选择性结合末端是N ‑乙酰葡糖胺(GlcNAc)的 糖链结构， 且AANL对GlcNAc ‑的特异性高于其他GlcNAc ‑结合的凝集素。 凝集素AANL这一糖 结合特性， 可作为GlcNAc ‑富集工具用于糖生物学和肿瘤 诊断标志物的鉴定。 发 明人前期用 AANL富集早期非小细胞肺癌患者和健康对照组的血清样本， 富集的糖蛋白/糖肽作为肿瘤 标志物用于肺癌早诊； 也富集骨髓瘤患者血清样本， 富集的糖肽用于骨髓瘤诊断标志物的 筛选。 [0004]硒是人体必需的微量元素， 是氨基酸硒代半胱氨酸的组成部分， 是生物合成硒蛋 白所必需的， 参与体内过氧化物和碘的代谢， 调节体内碘和自由基的水平， 并可以增强人体 的预防和抗病能力， 在许多生理过程中担 当着重要作用。 硒的有效和中毒剂量十 分接近， 难 以控制把握有效剂量。 单质硒以纳米态存在时毒性较无机硒和有机硒低， 但性质不稳定、 生 物活性较差， 达 到一定纳米尺度后在水相中就形成胶体， 具有生物活性和纳米尺度效应。 [0005]纳米硒(SeNPs)是 由单质硒(Se0)聚集而成， 具有负载率高、 毒性低、 活性好、 易合 成、 易储存等优点， 在生物医药领域具有广阔应用前景。 良好分散的纳米硒能有效清除机体 代谢产生的自由基， 具有抗氧化性能。 纳米硒颗粒还具有抗肿瘤活性， 尤其是对黑色素瘤、 肝癌和乳腺癌， 并且减少化疗药物所引发的肾脏和骨髓损伤等毒副作用。 纳米硒对荷瘤小 鼠具有显著的抗肿瘤和抗氧化作用， 并且在改善环磷酰胺诱 发的毒性和提高化疗效果方面 具有巨大的潜力， 可能对患者和化疗患者产生有益的影响。 [0006]然而， 纳米硒在水溶液中易聚集， 分散性较差， 导致其生物活性和生物利用度大大 降低。 研究表明用封端剂包被纳米硒是一种有效提高纳米硒生物活性和稳定性的策略。 利 用多糖作为封端剂， 可有效提高纳米硒在水溶液中的生物相容性和稳定性。 发明人前期用说　明　书 1/6 页 3 CN 115487311 A 3