ICS 67.100 CCS C 144 T/NAIA 团 体 标 准 T/ NAIA 0374—2025 牛奶和奶粉中 7种喹诺酮类残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of seven quinolones residues in milk and milk powder by HPLC-MS/MS 2025-03- 17发布 2025-03- 31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 I前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室（枸杞 及葡萄酒质量安全））、宁夏计量质量检验检测研究院、北方民族大学、宁夏化学分析测试协会 。 本文件主要起草人：朱燕燕、马桂娟、李强、姚博伟、 卜春苗、王泽岚、王鹏、吕毅、吴明 、 张小飞。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0374—2025 1牛奶和奶粉中 7种喹诺酮类残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1范围 本文件规定了 牛奶和奶粉中 7种喹诺酮类 （恩诺沙星 、环丙沙星 、诺氟沙星 、达氟沙星 、氧氟 沙星、沙拉沙星、洛美沙星）的液相色谱 -串联质谱检测方法。 本文件适用 牛奶和奶粉中 7种喹诺酮类的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样用2%的甲酸乙腈溶液提取 ，经分散固相萃取法净化 ，反相色谱柱分离 ，供液相色谱 -串联 质谱仪测定，外标法定量。 5试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1乙腈：色谱纯。 5.1.2甲酸：优级纯。 5.1.3无水硫酸镁：优级纯。 5.1.4十八烷基（ C18）粉末： 粒径 50μm。 5.1.5 2%甲酸乙腈溶液： 取20.0mL甲酸（ 5.1.2），用乙腈定容到 1000mL，混匀。 5.1.6 0.2%甲酸水溶液： 取2.0mL甲酸（ 5.1.2），用水 定容到 1000mL，摇匀。 5.1.7 0.2%甲酸乙腈溶液： 取2.0mL甲酸（ 5.1.2），用乙腈 定容到 1000mL，混匀。 5.2标准品 7种喹诺酮标准品名称、化学分子式、 CAS号和纯度 见附录表 A。 5.3标准溶液配制 5.3.1标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取 7种喹诺酮类标准品 10.00mg，用乙腈 (5.1.1)溶解并 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0374—2025 2定容至 10mL，避光冷冻贮存， 有效期为 3个月。 5.3.2混合标准储备液（ 10.0μg/mL ）：分别移取 7种标准储备液（ 5.3.1）100μL，用乙腈 (5.1.1)稀释 至10mL，避光冷冻贮存， 有效期为 1个月。 5.3.3混合标准工作溶液：用空白基质溶液配制成浓度 为0.2ng/mL 、0.5ng/mL 、1.0ng/mL 、 5.0ng/mL 、10.0ng/mL 、50.0ng/mL 、100.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。 6仪器和设备 6.1液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源。 6.2天平：感量 0.01m g和0.01g。 6.3涡旋混合器。 6.4高速离心机：转速 不低于 9000r/min 。 6.5超声波清洗器。 6.6氮吹仪。 6.7有机微孔滤膜， 孔径 0.22μm，或相当者。 7分析步骤 7.1制备与保存 取适量新鲜或解冻的牛奶，混合均匀， 于-18℃避光保存 。 取适量奶粉，混合均匀，常温避光保存。 7.2提取与净化 7.2.1提取 称取 5g牛奶或1g奶粉（精确到 0.01g）于50.0mL具塞离心管中， 加入 10g无水硫酸镁 （5.1.3），2%甲酸乙腈 10mL（5.1.5），涡旋混匀， 超声 20min，9000 r/min 离心 3 min，取上清液 ； 残渣再加入 2%甲酸乙腈 10mL（5.1.5）重复提取一次，合并上清液，待净化。 7.2.2净化 吸取 5mL上清液， 置于预先装有 100 mg C18（5.1.4）、500 mg无水硫酸镁 （5.1.3）的离心管 中，涡旋 3min，9000 r/min离心 5 min，取4mL上清液于 40 ℃水浴氮气吹至近干，初始流动相定 容至 1.0 mL，涡旋混匀， 用0.22 μm有机滤膜 （6.7）过滤后，上机测定。 7.3仪器参考条件 7.3.1液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18，2.1mm×150mm ，粒径 3.5μm或性能相当。 b）柱温： 30℃。 c）流动相： A：0.2%的甲酸水溶液 （5.1.6），B：0.2%甲酸乙腈溶液 （5.1.7）；梯度洗脱见表 1。 d）流速： 0.3mL/min 。 e）进样量： 5μL。 全国团体标准信息平台