ICS 67.100.10 CCS X 14 青岛市食品科学技术学会 发布 TB 团体标准 T/QDIFST 001—2024 牛乳及牛乳制品中 A1和A2型β-酪蛋白 的测定 毛细管电泳法 Determination of A1 and A2 β-casein in bovine milk and dairy products -Capillary electrophoresis method 2024-11-18发布 2024-12-18实施 全国团体标准信息平台 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分： 标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由青岛 市食品科学技术学会 提出并归口。 本文件起草单位：青岛农业大学、山东得益乳业股份有限公司 、青岛市畜牧兽医研究所 （青岛市畜牧工作站）、 青岛农业大学海都学院、 青岛新希望琴牌乳业有限公司 、山东安牧 乳业有限公司 、青岛荷斯坦奶牛养殖有限公司。 本文件主要起草人： 杨永新、栾庆刚、王建华、 于忠娜、刘佳、 陈明君、 王义坚、 范荣 波、韩荣伟、姜洪宁、都启晶、邓春霞 。 全国团体标准信息平台 T/QDIFST 001-2024 1 牛乳及牛乳制品中 A1和A2型β-酪蛋白的测定 毛细管电泳法 1 范围 本文件规定了毛细管电泳技术 测定牛乳及牛乳制品中 A1和A2型β-酪蛋白方法。 本文件适用于 生牛乳、液态乳和乳粉中 A1和A2 β-酪蛋白含量的 检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 A1型β-酪蛋白 A1 β -casein 氨基酸序列 第67位氨基酸为 组氨酸的β-酪蛋白。 3.2 A2型β-酪蛋白 A2 β -casein 氨基酸序列第 67位氨基酸为 脯氨酸的β-酪蛋白。 4 原理 乳中酪蛋白胶粒在尿素溶液中解离为蛋白质单体，在高压电场作用下，不同乳蛋白在羟 丙基甲基纤维素酸性缓冲液中的迁移速率呈现差异。基于 A1型和 A2型β-酪蛋白在分离过程 中的保留时间差异，通过紫外（或二极管阵列）检测器在波长 214 nm处进行检测。 5 试剂或材料 除非另有规定，所 用试剂仅为分析纯 ， 5.1 水： GB/T 6682 ，二级。 全国团体标准信息平台 T/QDIFST 001-2024 2 5.2 1 mol/L氢氧化钠溶液： 称取 4.00 g 氢氧化钠， 加水溶解， 转移至 100 mL容量瓶， 定容。 5.3 1 mol/L盐酸溶液： 量取 8.60 mL浓盐酸，加水稀释，转移至 100 mL容量瓶，定容。 5.4 4 mol/L磷酸溶液： 量取 24.60 mL 浓磷酸，加水稀释，转移至 100 mL容量瓶，定容。 5.5 8 mol/L尿素溶液： 称取 96.10 g尿素，加水溶解，转移至 200 mL容量瓶，定容。 5.6 磷酸盐溶液： 磷酸盐溶液（ pH 2.50 ± 0.02 ）：称取磷酸二氢钠 34.50 mg 、羟丙基甲 基纤维素 12.50 mg 、量取尿素溶液（ 5.5）18.80 mL ，转移至 25 mL容量瓶，用磷酸 溶液（ 5.4）调节 pH至2.50，定容。 5.7 样品还原缓冲液（ pH 8.00 ± 0.02 ）：称取柠檬酸三钠 365.00 mg 、二硫苏糖醇 190 .00 mg、量取尿素溶液（ 5.5）187.50 mL ，溶解于水中，用氢氧化钠溶液（ 5.2）调节 pH至8.00，定容至 250 mL，混匀。 5.8 A1型和 A2型β-酪蛋白标准储备溶液（ 10 mg/mL ）：将 A1型和A2型β-酪蛋白标准品 按其纯度换算后称量， 分别用样品还原缓冲液 （ 5.7） 定容至 10 mL。于-20 º C保存， 有效期 1个月。 5.9 A1型和A2型β-酪蛋白标准中间溶液（ 200 mg/L ）：分别准确移取 A1型和A2型β-酪 蛋白标准储备溶液 200 μL，用样品还原缓冲液（ 5.7）定容至 10 mL。现用现配。 5.10 A1型和A2型β-酪蛋白标准系列溶液：准确移取一定量的标准中间溶液（ 5.9），用 样品还原缓冲液（ 5.7）稀释定容， 分别配制成 A1型和A2型β-酪蛋白浓度分别为 0.0 mg/L、40.0 mg/L 、80.0 mg/L 、120.0 mg/L 、160.0 mg/L 和200.0 mg/L 的标准工作溶 液，现用现配。 5.11 微孔滤膜：水系， 0.22 μm。 6 仪器设备 6.1 毛细管电泳系统：配紫外 或二极管阵列检测器 。 6.2 低温离心机： 4ºC，转速不低于 10000 r/min 。 6.3 天平：精度 0.01 g、0.1 mg。 6.4 pH计：精度为 0.01。 6.5 涡旋混合仪 。 6.6 超声波震荡器 。 全国团体标准信息平台