ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中地西泮等 23种药物 检验 快速溶剂萃取气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for 23 sedative -hypnotics including diazepam in biological samples—Accelerated solvent extraction GC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T XXXX —XXXX I 前 言 本标准按照 GB/T1.1 —2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：杭州市公安局刑事科学技术研究所 。 本标准主要起草人 ：应剑波、李晓飞、罗永此、 唐磊、田国刚 、程建波、 卓晓聪、于海群 。GA/T XXXX —XXXX 1 法庭科学 生物检材中地西泮等 23种药物检验 快速溶剂萃取气相色谱 -串联质谱方法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中地西泮等 23种药物的快速 溶剂萃取气相色谱 -串联质谱 （ASE -GC-MS/MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于法庭科学 生物检材中 23种药物的定性分析和定量分析。其他可疑样品中 地西泮等 23 种药物的定性分析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 用快速溶剂萃取仪 （ASE）对生物检材 进行提 取、净化 及浓缩，采用气相色谱－串联质谱法 进行定性定量 ，以保留时间 、一级质谱或二级质谱的特征 离子碎片峰和 相对丰度比 作为定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法计算样品中药物的含量。 5 试剂和仪器 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a) 环己烷； b) 乙酸乙酯 ； c) 丙酮； d) 二氯甲烷 ； e) 甲醇； f) 无水硫酸钠 （分析纯） ； g) pH值10.0缓冲液： 1) 0.1 mol/L 氢氧化钠溶液 ：称取氢氧化钠 0.4g，用水溶解并稀释至 100mL； 2) 0.4 mol/L 硼酸溶液 ：称取硼酸 2.44g，用水溶解并稀释至 100mL； GA/T XXXX —XXXX 2 3) 0.4 mol/L 氯化钾溶液 ：称取氯化钾 2.98g，用水溶解并稀释至 100mL； 4) 量取 0.1 mol/L 的氢氧化钠溶液 43.7 mL，加入 0.4 mol/L 的硼酸溶液 12.5 mL，再加入 0.4 mol/L的氯化钾溶液 12.5 mL，混合均匀 ，得到 pH值10.0缓冲液； h) pH值6.0缓冲液：称取磷酸二氢钠 6.0g，用去离子水 450mL溶解，混匀，用 1.0mol/L氢氧化 钠溶液调 pH值至 6.0，用水定容至 500mL； i) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据地西泮等 23种标准物质 （ 23种药物的基本信息参见附录 A） 的纯度和盐型换算后，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 的标准储物质溶液，置 于 冰箱中冷藏保存。有效期 12个月。或采用市售标准溶液； 2) 20.0µ g /mL 混合标准工作 溶液：移取 1.0 mg/mL 的标准储备液各 1.0 mL，用甲醇稀释并 定容至 50mL混匀，配制成浓度为 20.0µ g /mL 的混合标准工作溶液， 置于冰箱中冷藏保 存。有效期 6个月。实验中所用其 他浓度的混合标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶 液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 颗粒状硅藻土 ； b) 中性三氧化二铝 ：（100～200）目，使用前在 130℃下活化 3h，冷却后按 6%比例加水搅拌均匀 ， 装入原瓶，平衡 24h后备用； c) 硅镁吸附 剂：（80～100）目，使用前在 130℃下活化 20h，冷却后按 4%比例加水搅拌均匀，装 入原瓶，平衡 24h后备用； d) 具盖离心管； e) pH试纸：范围 1～14。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -串联质谱仪：配有电子轰击源（ EI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 快速溶剂萃取仪 ； c) 凝胶色谱净化浓缩联用仪 ； d) 离心机； e) 移液器； f) 电子天平； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 快速溶剂萃取 移取血液等液体检材 样品 1.0mL～3.0mL， 或称取铰碎 （或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0g～3.0g， 加入 pH值6.0的缓冲液 0.5mL，混匀，再加入 5g的硅藻土搅拌均匀后，倒入底部装有 5g中性三氧化二铝GA/T XXXX —XXXX 3 或硅镁吸附剂 的萃取池中，按照 7.1.2.1.1条件进行操作。萃取完毕后，转移萃取液至试管中，高速离心 后取出有机相，按 7.1.2.1.2的条件用 凝胶色谱净化浓缩联用仪 浓缩至 0.5mL供分析，或置于浓缩器上在 温度 40 ℃浓缩至干，残留物用甲醇 0.5mL溶解，作为检材样品提取液供 仪器分析。 7.1.1.2 质控样品的制备 取等量相似基质的空白样品 （若无相似基质空白样品可用血液替代） 两份，一份作为空白样品，一 份添加地西泮等 23种物质，作为添加样品 （添加样品浓度为 0.1µ g/mL），与检材样品平行操作，得到空 白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 快速溶剂萃取条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等实际情况进行调整 ： a) 系统压力： 10 MPa； b) 萃取池温度： 110℃； c) 静态萃取时间： 6min； d) 静态萃取次数： 2次； e) 溶剂冲洗体 积：萃取池体积的 60%； f) 氮气吹扫时间： 100s； g) 萃取溶剂 ：乙酸乙酯 /环己烷 /丙酮（体积比 2∶2∶1）混合溶剂 或二氯甲烷 /环己烷 /丙酮（体积 比1∶1∶1）混合溶剂 。 7.1.2.1.2 凝胶色谱净化浓缩联用仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等实际情况进行调整 ： a) 净化柱： 20mm× 300mm ，填料 50.0g 中性多孔的交联苯乙烯二乙烯基苯聚合物或类似物 ； b) 流动相：环己烷 /乙酸乙酯 （体积比 1:1）混合溶剂； c) 流速： 4.70mL/min ； d) 收集时间： 收集 500s～1400s的洗脱液； e) 浓缩腔温度 ：40 ℃。 7.1.2.1.3 气相色谱 -串联质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等实际情况进行调整： a) 色谱柱： VF-5MS弹性石英毛细管柱（ 30m×0.25mm×0.25μm ）或其他等效柱 ； 注： VF-5MS柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程 ：100 ℃保持 1min，以 20 ℃/min 速率升至 280 ℃，保持 15min； c) 进样口温度： 280 ℃； d) 载气：高纯氦气； e) 载气流量： 1.0mL/min ，恒流； f) 进样方式：分流进样 ，分流比 10：1； g) 进样体积： 1µ L； h) 传输线温度： 280 ℃； i) 离子源温度： 230 ℃； GA/T XXXX —XXXX 4 j) 扫描方式： SCAN； k) 扫描范围： 45amu～450amu； l) EI源轰击能量： 70eV； m) EDR电压： 1300V； n) 碰撞气：高纯氩气，压力为 1.8mtorr； o) 离子化方式： EI+； p) 检测方式：多反应 离子监测（ MRM）； q) MS/MS质谱条件 （定性离子对、定量 离子对、 碰撞能量 ）：见表 1。