HHP ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中 海洛因代谢物 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for heroin metabolite s in biological samples—LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：重庆市公安局物证鉴定中心、公安部物证鉴定中心。 本标准主要起草人：王俊伟、王绘军、张松、张潮、于忠山、王芳琳、栾玉静。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中海洛因代谢物检验 液相色谱 -质谱方法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中海洛因代谢物吗啡、 O6-单 乙酰吗啡、 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡和可待因的液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于法庭科学生物检材中海洛因代谢物吗啡、 O6-单乙酰吗啡、 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡和 可待因的定性分析 和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、净化 及浓缩，用液相色 谱-质谱法定性、定量检测，以保留时间、质谱特征离子 碎片和相对丰度 比作为定性判断依据； 以峰面 积为依据，采用内标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇（色谱纯）； b) 乙腈（色谱纯）； c) 0.1mol/L碳酸铵溶液 ：称取碳酸铵 9.6g，加入水溶解并 稀释至1000mL； d) 标准溶液： 1) 1mg/mL吗啡、可待因和 O6-单乙酰吗啡标准物质溶液：根据吗啡、可待因和 O6-单乙酰吗 啡标准物质的纯度 和盐型，各称取适量， 分别用甲醇配制 1.0mg/mL 吗啡、可待因和 O6-单 乙酰吗啡标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。或采用市售标准溶液 ； 2) 1.0mg/mL 3-β-D-葡萄糖醛酸吗 啡标准物质溶液： 采用市售标准溶液， 置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3个月； 3) 10.0μg/mL 混合标准工作 溶液：移取 1.0mg/mL 的吗啡、可待因、 O6-单乙酰吗啡和 3-β-D- 葡萄糖醛酸吗啡标准物质溶液各 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷GA/T× × × × —× × × × 2 藏保存。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 10.0μg /mL标准物质 溶液用甲醇稀释得到； 4) 10.0µ g/mL 吗啡、可待因、 O6-单乙酰吗啡和 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡单一 标准工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的吗啡、可待因、 O6-单乙酰吗 啡和 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡 标准物质溶液 各0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0µ g/mL 的单一标准工作溶液， 密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均 由10.0µ g /mL标准物质溶液用甲醇稀释得到； 5) 1.0mg/mL 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡 -D3（M3G -D3）内标溶液：采用市售标准溶液，置于冰箱 中冷藏保存。有效期 3个月； 6) 10.0µ g/mL 3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡 -D3（M3G -D3）内标工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的3-β-D- 葡萄糖醛酸吗啡 -D3内标溶液 0.1mL， 用甲醇稀释至10mL， 混匀， 配制成浓度为 10.0µ g/mL 的内标工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 1个月。实验中所用其他浓度的内 标工作溶液均由 10.0µ g /mL标准物质溶液用甲醇稀释得到 。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 固相萃取柱： Oasis® HLB柱或等效固相萃取柱 ，依次用甲醇 、水、0.1 mol/L 碳酸铵溶液 活化。 注：Oasis® HLB 柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本 标准的使用者，并不是表示对 该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器与设备包括 ： a) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源 （ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 电子天平； c) 离心机； d) 涡旋振荡器； e) 移液器； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 固相萃取 移取血液等 液体检材 样品 1.0mL，或称取绞碎的肝脏等 固体检材 样品 1.0g于具盖离心管中， 加 0.1mol/L碳酸铵溶液 3mL，涡旋振荡 10min，8000r/min 离心 5min，取上清液 转移至已活化好的固相萃取 小柱中 , 控制流速小于 0.5mL/min ，用1mL 0.1 mol/L 碳酸铵溶液 淋洗，弃去淋洗液，挤干水分或离心或 真空抽固相萃取柱 2min，2mL甲醇洗脱，收集洗脱液 ，置于浓缩器上 50℃水浴下氮气吹干， 残留物用初GA/T× × × × —× × × × 3 始流动相 200μL溶解， 8000r/min 离心 5min，取上清液用有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供 仪器分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代） 两份于具盖离心管中， 一份作 为空白样品， 一份添加 吗啡、可待因、 O6-单乙酰吗啡 和3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡 标准物质，作为添加样 品（添加样品的浓度为 100ng /mL(g)），与检材样品平行操作，得到 空白样品提取液和 添加样品提取液 供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （液相色谱 -质谱） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品 等实际情况进行调整： a) 色谱柱： C18柱（ 4.6mm× 150mm ，5μm） ，或等效色谱柱 ； b) 流动相： A：甲醇；B：0.1％甲酸水溶液； c) 洗脱方式 ：梯度见表 1； 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B 0.0 0.5 20% 80% 3.0 0.5 90% 10% 9.0 0.5 90% 10% 10.0 0.5 20% 80% 20.0 0.5 20% 80% d) 进样量： 20µ L； e) 柱温：30℃； f) 流速：0.5mL/min ； g) 离子源：电喷雾离子源（ ESI）； h) 检测方式：正离子； i) 电喷雾电压 ：5200V； j) 离子源温度 ：400℃； k) 雾化气压力 ：35 Pa； l) 气帘气压力 ：20 Pa； m) MS参考条件 （定性、定量离子 对、锥孔电压 、碰撞能量 ）见表 2。 表2 MS参考条件 名称 定量离子对 定性离子对 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 吗啡 286.1＞165.1 286.1＞165.1 80 52.0 286.1＞201.1 35.0 3-β-D-葡萄糖 醛酸吗啡 462.2＞286.1 462.2＞165.1 80 84.0 462.2＞286.1 41.0 GA/T× × × × —× × × × 4 可待因 300.0＞165.1 300.0＞165.1 90 54.0 300.0＞199.2 40.0 O6-单乙酰吗 啡 328.0＞165.1 328.0＞165.1 100 49.0 328.0＞211.2 35.0 3-β-D-葡萄糖 醛酸吗啡 -D3 465.2＞289.1 465.2＞165.1 90 84.0 465.2＞289.1