ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中利多卡因 、 罗哌卡因 和布比卡因 检验 气相色谱 -质谱和液相色 谱-质谱法 Forensic sciences—Examination methods for lidocaine , ropivacaine and bupivacaine in biological samples—GC-MS and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、广西公安厅刑侦总队 、中国人民公安大学、 司法鉴定科学 研究院、山西医科大学 。 本标准主要起草人：张蕾萍、 于忠山、杜鸿雁、 黄克建、刘晓锋、 河洪源、 张云峰、董颖 、栾玉静 、 刘伟、沈敏、贠克明、王芳琳、何毅、李宏森 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中利多卡因 、罗哌卡因 和布比卡因 检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血、尿、肝、肾 、胃及胃内容 等）中利多卡因 、罗哌卡因 和布比 卡因的气相色谱 -质谱（ GC-MS）和液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量检验 方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中利多卡因 、罗哌卡因 和布比卡因 的定性分析和定量分析 。其他可 疑样品中利多卡因、罗哌卡因和布比卡因 的定性分析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 对生物检材进行提取、净化及浓缩 ，采用气相 色谱-质谱法和液相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间 、质谱特征离子碎片峰 和相对丰度 比作为定性判 断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱实验用水应 符合 GB/T 6682 中规定的三级水，液相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明 ，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 二氯甲烷 ； b) 乙酸乙酯 ； c) 硼砂； d) 磷酸二氢钠 ； e) 磷酸氢二钠 ； f) 氢氧化钠 ； g) 甲醇（色谱纯）； h) 乙腈（色谱纯）； i) 甲酸（色谱纯）； j) 醋酸铵（色谱纯） ； k) 5%甲醇 -水混合溶液 ； GA/T× × × × —× × × × 2 l) 磷酸盐缓冲液（ pH值6）：称取8.812g磷酸氢二钠 和27.37g磷酸二氢钠， 用水溶解并定容至 1000mL； m) 1%氢氧化钠溶液 ：称取 1g氢氧化钠 ，用水溶解 并定容至100mL； n) 0.1%甲酸水：移取 0.5mL甲酸，用水稀释并定容至500mL； o) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据利多卡因、罗哌卡因和布比卡因 标准物质的纯度和盐型换 算后，各称取适量， 分别用甲醇配制 1.0mg/mL 利多卡因、罗哌卡因和布比卡因 标准物质 溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 利多卡因、罗哌卡因和布比卡因标准物质 溶 液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。 实验中所用其 他浓度的混合标准工作 溶液均由 0.1mg/mL混合标准工作溶液用甲醇稀释得 到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB固相萃取柱 或等效固相萃取柱 ，使用前依次用 甲醇 3mL、水 3mL活 化； 注： Oasis® HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果， 则可使用这些等效产品。 d) pH试纸：范围 1~14； e) 一次性注射器 ； f) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 GA/T× × × × —× × × × 3 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中， 加入1%氢氧化钠溶液调 pH值至9， 振荡混匀， 再加入 5mL～10mL二氯甲烷或乙酸乙酯， 振荡 10min， 8000r/min 离心 10min，分离有机相， 重复提取一次 ，合并两次提取的有机相， 置于浓缩 器上50℃浓缩至 干，残留物用甲醇 50µ L～100µ L溶解，作为检材样品提取液供 GC-MS分析或残留物用200µ L～1000µ L 甲醇溶解后，用 0.22μm的有机系微孔滤膜过滤 ，供LC-MS分析。 7.1.1.2 固相萃取 (适用于新鲜样品) 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g，加入 pH 值6的磷酸缓冲液 4mL～8mL，振荡 15min，8000r/min 以上离心 20min，取上清液转移至已活化好的固相 萃取柱中， 控制上清液过柱 ，流速为 0.5mL/min ～1.0mL/min ，用5%甲醇水 3mL淋洗，挤干水分或离心 或真空抽固相萃取 柱2min，用二氯甲烷 4mL洗脱，收集洗脱液并 置于浓缩器上 50℃浓缩至干， 残留物用 甲醇 50µ L～100µ L溶解，作为检材样品提取液供 GC-MS分析或残留物用200µ L～1000µ L甲醇溶解后，用 0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加利多卡因、罗哌卡因和布比卡因标准物质，作为添加样品（ GC-MS添加样品的 浓度为 0.5µ g/mL(g) ，LC-MS添加样品的浓度为 50ng/mL(g) ），与检材样品平行操作，得到 空白样品提取 液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： DB-1MS柱（ 30m× 0.32mm× 0.25µ m ）或等效色谱柱； 注： DB-1MS柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100℃保持 2min，以15℃/min 速率升至280℃，保持 17min； c) 进样口温度： 280℃； d) 传输线温度： 230℃； e) 离子源温度： 200℃； f) 载气：高纯氦； g) 柱流量： 1mL/min～2mL/min； h) 进样方式 ：分流进样 ，分流比： 5:1～50:1； i) 扫描方式：全扫描（ SCAN），质量扫描范围 40amu～450amu。 7.1.2.1.2 液相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： ZORBAX Eclipse Plus C 18柱(2.1mm× 100mm ，1.8µ m)或等效色谱柱； 注： ZORBAX Eclipse Plus C 18柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相：A：乙腈；B：0.1%甲酸水溶液； c) 洗脱方式： 梯度洗