ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中灭多威和灭多威 肟 检验 气相色谱 -质谱和液相色谱-质谱法 Forensic scie nces—Examination methods for methomyl and methomyl oxime in biological samples —GC-MS and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、运城市公安局 。 本标准主要起草人： 王瑞花、张云峰、常靖、任昕昕、王爱华、刘彦军。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中灭多威和 灭多威肟 检验 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了生物检材 （血、尿、肝、肾 、胃及胃内容等） 中灭多威 及灭多威肟 的气相色谱 -质谱 （GC-MS）定性检验方法和液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量 检验方法 。 本标准适用于生物检材中灭多威 和灭多威肟 的定性分析和定量分析 。其他可疑 样品中灭多威 及灭多 威肟的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名 词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对生物检材进行 提取、净化及浓缩， 采用气相 色谱-质谱法定性 ，液相色谱 -串联质谱法定性定量 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度 比作 为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法 进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水 ，液相色谱 -串联质谱 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的 一级水。除非另有说明，在分析中使用 的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 甲醇； b) 乙酸乙酯 ； c) 二氯甲烷； d) 中性氧化铝或硅镁吸附剂 ； e) 乙腈（色谱纯） ； f) 丙酮； g) 甲酸（色谱纯） ； h) 无水硫酸钠 ； i) 标准溶液 ： GA/T × × × × —× × × × 2 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据灭多威和灭多威肟 标准物质的纯度 ，各称取适量， 分别用 甲醇配制 1.0mg/mL 灭多威和灭多威肟 标准物质溶液 ，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个 月。或采用市售标准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 混合标准工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的灭多威和灭多威 肟标准物质溶液各 1.0mL， 用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期3个月。实验中所用 其 他浓度的混合标准工作 溶液均由0.1mg/mL标准物质 溶液用甲醇稀释得到 ； 3) 10.0 µg/mL灭多威和灭多威肟单一标准工作 溶液：移取1.0mg/mL 的灭多威和灭多威肟标 准物质溶液各 0.1mL于10mL容量瓶中， 用 甲醇稀释至刻度， 混匀 ，配制成浓度为 10.0 µg/mL 的单一标准工作 溶液，密封，置 于冰箱中冷 藏保存，有效期1个月。实验中所用 其他浓度 的单一标准工作溶液均由 10.0 µg/mL标准物质 溶液用甲醇稀释得到 。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心 管； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB柱或等效固相萃取柱 ，依次用甲醇 、水活化； 注： Oasis® HLB 柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 d) 一次性注射器 ； e) 有机系微孔滤膜 ：0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱仪，配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； c) 电子天平 ； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的 肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g于具盖离心 管中，加入乙酸乙酯 4.0mL～8.0mL，振荡 5min，8000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次， 合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，置于浓缩器上 45℃浓缩至干， 残留物用甲醇 200L溶解，GA/T × × × × —× × × × 3 作为检材样品提取液 供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。如需净化，按 7.1.1.4操作。 7.1.1.2 丙酮/水混合溶剂 提取 移取血液等液体 检材样品 5.0mL～10.0mL，或称取铰碎的 固体检材样品 5.0g～10.0g，用丙酮 /水混 合溶剂（体积比 4:1）50mL～100mL浸泡 3h以上（或超声 1h以上）。 8000r/min 离心 10min，分离上清液， 置于水浴锅上 50℃浓缩至 2mL左右，离心， 取上清液移至离心管中， 再加入乙酸乙酯 6.0mL， 振荡 10min， 8000r/min 离心 10min，分离有机相，重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 45℃浓缩至 干，残留物用甲醇200L溶解，作为检材样品提取液 供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤， 供LC-MS分析。如需净化，按 7.1.1.4操作。 7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液 体检材样品1.0mL～2.0mL， 或称取绞碎的肝脏等固体 检材样品1.0g～2.0g于具盖离心 管中，用4倍体积水稀释，振荡 10min，8000r/min 离心 20min，取上清液转移至已活化好的 C18固相萃取 柱中，控制上清液过柱流速为 0.5mL/min 过柱，依次用 1mL水、 1mL甲醇 /水 (体积比 5:95)淋洗，抽干弃 去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱2min，用2mL乙酸乙酯或乙酸乙酯 /二氯甲烷（ 体积比 1:1）洗脱， 控制流速为 0.5mL/min ，收集洗脱液并置于浓缩器上 45℃浓缩至干， 残留物用甲醇200L溶 解，作为检材样品提取液 供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。如需净化， 按7.1.1.4操作。 7.1.1.4 样品净化 （中性氧化铝柱净化法） 净化过程 包括： a) 装柱：少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠 1g～2g、中性氧化铝 2g～5g或硅镁吸附剂、无水硫 酸钠 2g～3g； b) 净化：用与提取液相同的溶剂 6.0mL预淋洗装好的柱子，弃 去预淋液，将检材样品提取液 过 柱，再用与提取液相同的溶剂 6.0mL洗脱。收集合并过柱液 及洗脱液 ，置于浓缩器上 45℃浓 缩至干，用200 µ L甲醇溶解，供GC-MS分析或用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS 分析。 7.1.1.5 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品 （若无相似基质空白样品可用血液替代） 两份于具盖离心管中 ，一份作 为空白样品 ，一份添加灭多威 或灭多威 肟标准物质，作为添加样品（ GC-MS添加样品的浓度为 1.0µg/mL(g)，LC-MS添加样品的浓度为 20ng/mL(g)），与检材样品平行操作 ，得到空白样品提取液和 添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： HP-5柱（ 30m× 0.25mm ，0.25µ m）或等效色谱柱； 注：HP-5柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 b) 色谱柱温程： 100℃保持 2min，以 30℃/min速率升至 280℃，保持 17.5min； GA/T × × × × —× × × × 4 c) 柱