ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中 沙蚕毒素、杀虫双、 杀虫环和杀螟丹 检验 气相色谱、 气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for nereistoxin, bisultap, thiocyclam and cartap in biological samples —GC,GC-MS and LC-MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本标准起草单位：杭州市公安局刑事科学技术研究所、浙江省公安厅物证鉴定中心、湖州市公安局 刑事科学技术研究所。 本标准主要起草人：应剑波、唐磊、傅得锋、宣宇、崔艳华 。GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中 沙蚕毒素、杀虫双、杀虫环和杀螟丹 检验 气相色谱、气相色谱 -质谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中沙蚕毒素的气相色谱（ GC） 定量检验方法和 气相色谱 -质谱（GC-MS）、气相色谱 -串联质谱 （GC-MS/MS）定性定量 检验方法， 以 及法庭科学生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中杀虫双、 杀虫环和杀螟丹的液相色谱 -串联 质谱（LC-MS/MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于法庭科学生物检材中沙蚕毒素、 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 的定性分析和定量分析。 其 他可疑样品中 沙蚕毒素、 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 的定性分析和定量分析可参照使用 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行 提取、净化及浓缩 。 对于沙蚕毒素检验， 采用气相色谱 -质谱法、气相色谱 -串联质谱 法进行定性定量，气相色谱法进行 定量，以保留时间、特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进 行定量分析。 对于杀虫双、杀虫环和杀螟丹 ，采用液相色谱 -串联质谱 法进行定性定量， 以保留时间、 质谱特征 离子和相对丰度 比作为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法 进行定量分析 。 5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱 、气相色谱 -质谱和气相色谱 -串联质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水，液相 色谱 -串联质谱实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分 析纯，试剂包括 ： a) 环己烷； b) 乙酸乙酯； c) 甲醇（色谱纯）； d) 丙酮； GA/T × × × × —× × × × 2 e) 甲酸； f) 氨水； g) 醋酸钠； h) 1mol/L醋酸溶液 ； i) 0.1mol/L氢氧化钠溶液： 称取氢氧化钠 0.4g，用水溶解并定容至 100mL； j) 1.0mol/L氢氧化钠溶液 ：称取氢氧化钠 20.0g，用水溶解并定容至 500mL； k) pH值6.0醋酸缓冲液： 称取醋酸钠 54.6g，加入1mol/L醋酸溶液 20mL溶解，用水稀释并定 容至500mL； l) pH值10.0缓冲液： 称取磷酸二氢钠 6.0g，用去离子水 450mL溶解，混匀，用 1.0mol/L 氢氧 化钠溶液调 pH值至 10.0，用水定容至 500mL； m) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据沙蚕毒素标准物质的纯度， 各称取适量，分别 用甲醇配制 1.0mg/mL 沙蚕毒素 、杀虫双、杀虫环和杀螟丹 标准物质溶液，置于冰箱中冷冻保存。有 效期 12个月。或采用市售标准溶液； 实验中所用其它浓度的 单一标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液 用甲醇稀释得到； 2) 0.1mg/mL杀虫双、杀虫环和杀螟丹 混合标准工作溶液：移取 1.0 mg/mL 的杀虫双、杀虫 环和杀螟丹标准物质溶液 各1.0 mL， 用甲醇稀释并定容至 10mL， 配制成浓度为 0.1mg/mL 的杀虫双、杀虫环和杀螟 丹混合标准工作溶液 ，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。实 验中所用其它浓度的混合标准工作溶液均由 0.1mg/mL 杀虫双、杀虫环和杀螟丹 混合标准 工作溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 颗粒状硅藻土 ； b) 中性三氧化二铝 ：（100～200 ）目，使用前在 130℃下活化 3h，冷却后按 6%比例加水搅拌均匀 ， 装入原瓶，平衡 24h后备用； c) 硅镁吸附剂 ：（80～100）目，使用前在 130℃下活化 20h，冷却后按 4%比例加水搅拌均匀，装 入原瓶，平衡 24h后备用； d) SLE萃取柱或其他等效萃取柱； e) 固相萃取柱： 1) C18固相萃取柱或 等效固相萃取柱 ，使用前依次用 3mL甲醇和 3mL去离子水活化 ； 2) 混合型弱阴离子交换固相萃取柱 ，使用前依次用 3mL甲醇和 3mL去离子水活化 ； f) 有机系微孔滤膜 ：0.22μm。 6 设备和仪器 仪器和设备 包括： a) 气相色谱仪：配 FPD（硫滤光片）检测器； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 气相色谱 -串联质谱仪：配有电子轰击源（ EI）和三重四级杆质量分析器； d) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四级杆质量分析器； e) 快速溶剂萃取仪； f) 离心机； GA/T × × × × —× × × × 3 g) 移液器； h) 电子天平； i) 浓缩器； j) 匀浆仪。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 （适用于生物检材中沙蚕毒素检验） 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎 （或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g 于具盖离心管中 ，加入 pH值10.0缓冲液 0.5mL，混匀后加入乙酸乙酯 3.0mL~ 6.0mL，振荡提取 10min， 8000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 40℃条件下 浓缩至干，残留物 用甲醇200μL溶解，作为检材样品提取液， 供仪器分析。 7.1.1.2 固相萃取法 1（适用于血液、尿液样品中沙蚕毒素检验） 移取血液 或尿液检材样品 1.0mL～2.0mL，于具盖离心管中 ，加入 pH值10.0缓冲液 6mL，8000r/min 离心 10min，取上清液转移至已活化好的 C18固相萃取柱中 ，控制上清液过柱流速为 0.5mL/min 过柱，用 去离子水 3mL淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱2min，用氯仿 /异丙醇（体 积比 9:1）混合溶剂 5mL洗脱，收集洗脱液 并置于浓缩器上 40℃浓缩至干，残留物 用甲醇200μL溶解，作 为检材样品提取液， 供仪器分析。 7.1.1.3 固相支撑液液 萃取法（适用于血液、尿液样品中沙蚕毒素检验 ） 移取血液 或尿液检材样品 1.0mL～2.0mL，于具盖离心管中， 加入 pH值10.0缓冲液 0.5mL，混匀后加 入到 SLE萃取柱中，适当施加正压使样品完全吸附到萃取柱填料中，静置 5min，加入乙酸乙酯 3mL，在 自然重力作用下通过萃取柱， 收集流出液， 加入 3mL乙酸乙酯进行再次洗脱，合并 两次流出液并置于浓 缩器上40℃浓缩至干，残留物 用甲醇200μL溶解，作为检材样品提取液， 供仪器分析。 7.1.1.4 快速溶剂萃取法 （适用于生物检材中沙蚕毒素检验） 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎 （或匀浆） 的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g 于具盖离心管中， 加入 pH值10.0缓冲液 0.5mL，然后与适量的硅藻土混匀 ，再倒入底部装有 5g三氧化二 铝或硅镁吸附剂的萃取池中， 按照 7.1.2.1.1条件进行操作。 萃取完毕后 ，将萃取液倒入试管中 ，8000r/min 离心 10min，取出有机相， 置于浓缩器上 40℃条件下浓缩至干，残留物用甲醇 200μL溶解，作为检材样 品提取液，供仪器分析 。 7.1.1.5 固相萃取法 2（适用于生物检材中杀