ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中草甘膦检验 离子色谱-质谱法 Forensic sciences —Examination methods for glyphosate in biological samples—IC-MS ××××-××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 -2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、浙江省公安厅、山东省公安厅。 本标准主要起草人：侯小平、 任昕昕、 栾玉静、于忠山、傅 得锋、高宏、张广华。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材 中草甘膦检验 离子色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中草甘膦的离子色谱 -质谱 （IC-MS/MS）定性定量 检验方法。 本标准适用 于法庭科学 生物检材中 草甘膦的定性分析和定量分析。其他可疑样品中草甘膦 的定性分 析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取 及净化，采用离子色谱 - 质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和相对丰度 比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用 外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水，试剂包括： a) 乙腈（色谱纯） ； b) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据草甘膦标准物质的纯度 和盐型换算后 ，称取适量， 用水配 制1.0mg/mL草甘膦标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标 准溶液； 2） 10.0µg/mL标准工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 的草甘膦标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 3个月。实验中所用其他浓度的标准 工作溶液均由 10.0µ g/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 GA/T × × × × —× × × × 2 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 容量瓶； d) 水系微孔滤膜： 0.22µ m； e) 离子色谱样品前处理净化柱： Dionex OnGu ard Ⅱ RP柱或等效柱。 注：Dionex OnGuard Ⅱ RP柱是 Thermo公司产品 的商品名称 ，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其 他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 离子色谱 -质谱仪： 配有离子色谱仪 、电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； b) 电子天平； c) 离心机； d) 涡旋振荡器； e) 移液器； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 沉淀蛋白 移取血液等液体 检材样品 1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材样品 1.0g～2.0g于具盖离 心管中，加入乙腈 2.0mL～4.0mL，振荡 10min，8000r/min 离心 20min，分离上清液，用去离子水稀释 5倍，稀释液过离子色谱样品前处理净化柱净化，将最先流出的 3mL液体弃去后， 收集剩余的流出液， 经水系微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液 供仪器分析。 7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品， 一份添加草甘膦标准物质 ，作为添加样品（ 添加样品的浓度为 1.0µg/mL(g)）与检材样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 以下为参考 条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： Dionex IonPac® AS11 -HC型阴离子分析柱 (250mm× 2mm) 及Dionex IonPac® AG11 -HC 型阴离子保护柱 (50mm× 2mm) 或其他等效柱； 注：Dionex IonPac® AS11 -HC型阴离子分析柱及 Dionex IonPac® AG11 -HC型阴离子保护柱色谱柱 均为Thermo公 司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产 品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 淋洗液：80mmol/L 氢氧化钾 ； GA/T × × × × —× × × × 3 c) 柱温： 30℃； d) 流速： 0.3mL/min； e) 离子源：电喷雾电离（ ESI）； f) 检测方式： 负离子； g) 毛细管电压： -4.5kV； h) 雾化气温度： 550℃； i) 雾化气： 60psi； j) 扫描模式：多反应离子监测（ MRM）； k) MS参考条件 （定性、定量离子对 、去簇电压、碰撞能 ）见表1。 表1 MS参考条件 中文名称 定量离子对 定性离子 对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 草甘膦 168.0＞63.0 168.0＞63.0 -30.0 -35.0 168.0＞150.0 -17.0 168.0＞78.9 -55.0 7.1.2.2进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液， 按7.1.2.1的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL～2.0mL 两份，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g～2.0g 两 份，按 7.1.1进行操作； 另取等量 相似基质的空白样品 三份，其中两份分别添加 草甘膦标准物质，作为添加样品 （添加样品 中目标物含量应为检材 样品中目标物含量的 (100± 50)% ），另一份 作为空白样品，与检材 样品平行 操 作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1仪器条件 按7.1.2.1规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、 空白和添加样品提取液 及标准工作溶液， 按7.1.2.1的分析条件每个样品进样分析 2～ 3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1计算含量 记录各样品 提取液平行进样 2～3次的目标物保留时间和 峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样添样添样 V MAV MAW = ................................ ................................ ....... (1) 式中： W－检材样品中目标物 的含量，单位为微克每克（ µg/g）或微克每毫升（ µg/mL）； GA/T × × × × —× × × × 4 A样－检材样品提取液中目标物峰面积平均值； M添－添加样品中目标物添加量，单位为微克（ µg）； V样－检材样品的定容体积，单位为毫升（ mL）； A添－添加样品提取液中目标物峰面积平均值； M样－检材样品的取样量，单位为克（ g）或毫升（ mL）； V添－添加样品的定容体积，单位为毫升（ mL）。 7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品 中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： %1002 1−= XXXRD ................................ ................................ ...... (2) 式中： RD－相对相差 ，用百分比（ %）表示； X1、X2－两个检材 样品平行定量测定的含量数值； X －两个检材样品平行 定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标