ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T ××××－× × × × 法庭科学 血液中甲磺隆等四种磺酰脲类 除草剂检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for four sulfonylurea herbicides including metsulfuron in blood samples—LC and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：北京市公安 司法鉴定中心 （一）。 本标准主要起草人： 杨士云、乔静、杨继锋、王燕燕 、卫娟娜 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 血液中甲磺隆等四种磺酰脲类除草剂 检验 液相色谱 和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 血液中甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆和玉嘧磺隆 的高效液相色谱 （HPLC）定量 检验方法 和液相色谱 -质谱（ LC-MS）定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 血液中甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆和玉嘧磺隆 的定性分析和定量分析。其他可 疑样品中甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆、玉嘧磺隆 的定性分析和定量分析 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照， 按平行操作的要求 ，对血液进行提取、净化 及浓缩，采用高效液相 色谱法定量，液相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、质谱特征离 子和相对丰度 比作为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂及材料 5.1 试剂 实验用水 应符合 GB/T 6682 中规定的一级 水。除非另有说明 ，在分析中 使用的试剂均为分析纯 ， 试剂包括： a) 甲醇（色谱纯）； b) 乙腈（色谱纯）； c) 甲酸（色谱纯）； d) 乙酸乙酯； e) 无水硫酸钠； f) 中性氧化铝 或硅镁吸附剂 ； g) 0.1%甲酸水溶液：取 1mL甲酸，用水稀释至1000m L； h) 甲醇 /水混合溶液（体积比 1:9）：10mL甲醇与 90mL水混合； i) 标准溶液 ： GA/T× × × × —× × × × 2 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆、玉嘧磺隆 标准物质的纯度 ，各 称取适量， 分别用乙腈配制 1.0mg/mL甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆、玉嘧磺隆 标准物质溶液， 置于冰箱中 冷藏保存。有效期 3个月。或采用市售标准溶液； 2) 0.1mg/mL 混合标准工作溶液 ：移取1.0mg/mL 的甲磺隆、苯磺隆、 噻磺隆、玉嘧磺隆标准 物质溶液 各1.0mL，用乙腈稀释至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 1个 月； 3) 10.0μg/mL 混合标准工作 溶液：移取0.1mg/mL 的甲磺隆、苯磺隆、噻磺隆、玉嘧磺隆 标 准物质溶液 1.0mL，用乙腈稀释至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 1个 月； 4) 1.0μg/mL 混合标准工作溶液 ：移取10μg/mL的甲磺隆、苯磺隆、噻磺隆、玉嘧磺隆 标准 物质溶液 1.0mL，用乙腈稀释至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。有效期 1个月。 实验中所用其 他浓度的混合标准工作溶液均由 1.0μg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 一次性注射器 ； d) 有机系微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 高效液相色谱仪： 配有二极管阵列检测器（ DAD）； c) 电子天平 ； d) 离心机； e) 振荡器； f) 超声波清洗器； g) 移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液样品 1.0mL～2.0mL，加入乙酸乙酯 4.0mL～8.0mL，超声振荡 10min，高速离心 5min， 分离有机相，重复提取一次，合并两次提取的有机相 ，用无水硫酸钠脱水后， 常温空气流下 浓缩至干 ， 残留物用 乙腈 200L溶解，用有机系微孔滤膜过滤 ，作为检材样品提取液， 供仪器分析。如需净化， 按7.1.1.2操作。 7.1.1.2 样品净化（ 中性氧化铝柱净化法 ） GA/T× × × × —× × × × 3 净化过程包括 ： a） 装柱：少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠 1g～2g、中性氧化铝 或硅镁吸附剂 2g～5g、无水硫 酸钠 2g～3g； b） 净化：用与提取液相同 的溶剂 6.0mL预淋洗装好的柱子，弃去预淋液，将检材样品提取液过 柱，再用与提取液相同的溶剂 6.0mL洗脱。收集合并过柱液及洗脱液， 常温空气流下 浓缩至 干，残留物用乙腈 200L溶解，用0.22μm的有机系微孔滤膜过滤 ，作为检材样品提取液， 供仪器分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量空白血液样品两份于 具盖离心管中 ，一份作为空白样品 ，一份添加 苯磺隆、 甲磺隆、 噻磺隆、 玉嘧磺隆 标准物质 ，作为添加样品 （添加样品 的浓度为 50ng/mL(g)），与检材样品平行操作 ，得到空 白样品提取液和添加样品提 取液供仪器 分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 液相色谱条件 7.1.2.1.1 .1 参考条件一 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： ZORBAX Eclipse Plus C 18柱（ 2.1mm×100mm，3.5μm）或等效色谱柱； 注： ZORBAX Eclipse Plus C 18柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用 这些等效产品。 b) 流动相： A：乙腈，B：0.1%甲酸水溶液； c) 梯度洗脱程序见表 1； 表1 梯度洗脱 程序一 时间 min 乙腈 0.1%甲酸水溶液 0 20% 80% 2 50% 50% 4 90% 10% 8 20% 80% d) 流速： 0.3mL/min； e) 检测器：DAD检测器或 UV检测器； f) 检测波长： 250nm； g) 柱温： 30℃； h) 进样量： 10μL。 7.1.2.1.1.2 参考条件二 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： ZORBAX Eclipse Plus C18柱（ 2.1mm×100mm，3.5μm）或等效色谱柱 ； 注： ZORBAX Eclipse Plus C 18柱是安捷伦公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 GA/T× × × × —× × × × 4 b) 流动相： A：甲醇，B：0.1%甲酸水溶液； c) 流速： 0.3mL/min； d) 柱温：常温； e) 检测器： DAD检测器或 UV检测器； f) 检测波长： 250nm； g) 进样量： 10μL； h) 梯度洗脱程序见 表2； 表2 梯度洗脱 程序二 时间 min 甲醇 0.1%甲酸水溶液 0 20% 80% 2 50% 50% 4 90% 10% 12 20% 80% 7.1.2.1.2 液相色谱 -质谱条件 7.1.2.1.2.1 色谱参考条件 同7.1.2.1.1条件。 7.1.2.1.2.2 质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 离子源：电喷雾离子源 （ESI）； b) 扫描方式：正离子 ； c) 检测方式：多反应 离子监测（MRM）； d) 电喷雾电压： 4936V； e) 离子传输管温度： 350 ℃； f) 辅助器加热温度： 350℃； g) 雾化气： 43 ps