ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T ××××－× × × × 法庭科学 疑似毒品中二亚甲基双氧安非他 明检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for methylene dioxyamphetamine in suspected drugs —LC and LC -MS ×××× -×× -××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T × × × × —× × × × I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ） 提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、陕西省公安厅 。 本标准主要起草人： 高利生、张春水、郑珲、翟晚枫、 杨永登、常颖、赵阳、 贺剑锋、 刘克林、黄 星、王一、王 蔚昕、赵彦彪、李彭 、杨虹贤、郑晓雨 。 GA/T × × × × —× × × × 1 法庭科学 疑似毒品中 二亚甲基双氧安非他明检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学领域疑似毒品中 二亚甲基双氧 安非他明（MDMA）的液相色谱 -质谱 （ LC-MS） 定性检验方法和液相色谱（ LC）定量检验方法。 本标准适用于法庭科学 领域疑似 毒品样品中MDMA的定性分析和定量分析。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4883 —2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 JJF 1059.1 —2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件。 4 原理 对疑似毒品样品中的 MDMA进行提取。采用液相色谱 -质谱检测，以保留时间、质谱特征离子碎 片峰和离子丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱检测，用标准曲线法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 甲酸； d） 水合磷酸二氢钠 ：分析纯 ； e） 浓磷酸； f） 三乙胺； GA/T × × × × —× × × × 2 g） 内标物： 苯乙胺； h） 标准溶液： 1）标准物质溶液： 1.0mg/mLMDMA 标准物质溶液； 2）标准工作溶液按实验需求分为以下三类： ——定性用标准工作溶液： 移取 1.0mg/mL 的MDMA标准物质溶液适量 ，用甲醇稀释，配制 成1ng/mL的MDMA标准工作溶液； 其余浓度定性用标准工作溶液，按实验需求由 1.0mg/mL 的MDMA标准物质溶液稀释配制； ——外标法用标准工作溶液：使用 1.0mg/mL MDMA标准物质溶液 ，用甲醇逐级稀释 ，配 制成0.1mg/mL 、0.05mg/mL 、0.01mg/mL 、0.005mg/mL 、0.001mg/mL 的MDMA标准工 作溶液； ——内标法用标准工作溶液： 称取苯乙胺 500mg， 用甲醇定容到 50mL容量瓶中， 配制成 10.0 mg/mL苯乙胺内标储备溶液（置于冰箱中保存， 有效期 12个月）。 使用时用甲醇稀释， 配制成 0.1mg/mL的苯乙胺溶液。内标法用标准工作溶液 制备方法参见附录 A中表 A.1， 移取相应体积的 1.0mg/mL MDMA标准物质溶液 、0.1mg/mL 苯乙胺溶液至 1mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度， 配制 MDMA浓度分别为 0.1mg/mL 、0.05mg/mL 、0.01mg/mL 、 0.005mg/mL 、0.001mg/mL 的MDMA标准工作溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 有机微孔滤膜： 0.22µ m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a） 液相色谱仪（ LC）：配有二极管阵列（ DAD）或紫外检测器（ UV）； b） 液相色谱 -质谱仪（ LC-MS）：配电喷雾离子源、 三重四极杆质量分析器 ； c） 电子天平：分度值 d：0.01mg； d） 离心机； e） 涡旋振荡器； f） 真空抽滤泵； g） 超声清洗仪； h） 10mL和1mL移液器或移液管； i） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 GA/T × × × × —× × × × 3 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲醇，密封并振荡 10min，6000r/min 离心 5min，离心 后取出适量上清液稀释，用 0.22µm的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 同时用 LC-MS分析定性用标准工作溶液进行质量控制。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： poroshell 120 C 18 （3.0mm×50mm,2.7 μm）或其他等效柱 ； 注： poroshell 120 C 18柱为 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 流动相：A：0.2%甲酸溶液，B：甲醇； c） 梯度程序： 见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 80% 20% 3 74% 26% 7 40% 60% 10 23% 77% 10.01 5% 95% 10.5 5% 95% d） 流速： 0.3mL/min ； e） 离子源：电喷雾离子源； f） 扫描方式：正离子模式； g） 毛细管电压：4000V； h） 干燥气： 10L/min； i） 干燥气温度： 350℃； j） 雾化气： 25psi； k） 后处理时间（平衡时间）： 3.5min； l） 后处理流速： 0.4mL/min ； m） MDMA的离子对和 Fragmentor 电压、碰撞能量 (CE)：见表 2。 表 2 质谱参考 条件 名称 母离子 子离子 Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV MDMA 194.1 163.0 80 10 135.0 21 7.1.2.2 进样 GA/T × × × × —× × × × 4 分别吸取（空白）甲醇溶液、 定性用标准工作溶液和样品提取液适量，按 7.1.2.1条件进样分析。 7.1.3 记录 分别记录标准物质和 样品中目标物 的保留时间 、定性离子对 及离子丰度比。 7.2 定量分析 7.2.1 外标法 7.2.1.1 标准工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1条件分析 外标法标准工作溶液， 以标准工作溶液中目标物的峰面积值为纵坐标，目标 物浓度为横坐标， 绘制成线性范围为 0.001mg/mL ～0.1mg/mL 的MDMA标准工作曲线 。 7.2.1.2 标准工作曲线监测 采用浓度为 0.005 mg/mL和0.1mg/mL 的外标法用 标准工作溶液作为监测样品， 建立标准工作曲线时， 每个监测样品各分析 10次，计算 MDMA峰面积的平均值及标准偏差（ SD）。每次检验前先分析监测样 品，监测样品的结果在平均值 ± 3SD之间，标准工作曲线有效 ；监测样品的结果 超出平均值 ± 3SD，应重 新绘制标准工作曲线。 7.2.1.3 样品提取 平行称取样品 2份各约 10mg于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度， 则平行称取样品 6份） ， 加入 10mL甲醇，密封并振荡 10min，6000r/min 离心 5min，离心后取出适量上清液稀释，用 0.22µ m的有 机系微孔滤膜过滤 ，供LC-DAD或LC-UV分析。可根据实验情况调整样品称量重量。 7.2.1.4 仪器检测 7.2.1.4.1 液相色谱仪 条件 以下为参考条件，按照本 方法所获得的液相色谱图参见 附录 B，可根据不同品牌仪器和不同样品等 实际情况进行调整： a）检测器：二极管阵列或可变波长紫外检测器； b）色谱柱： ODS，(150mm×4.6mm ,5μm）； c）柱温： 30℃； d）缓冲液：磷酸缓冲溶液（ 36mmol/L，0.25%三乙胺 v/v）。以配制 2000 mL为例：称取水合磷酸 二氢钠固体 11.4g，量取浓磷酸 5mL及三乙胺 5mL，用水定容至 2000mL的容量瓶中，摇匀。 用真空抽滤泵