ICS 13.310 A 92 中 华人 民 共和国 公共安 全 行业 标准 GA GA/T XXXX—XXXX 法庭科学 DNA二代测序检验规 范 Forensic sciences—Specificatio ns for second gene ration sequencing -based DNA examination 2020-08-01发布 2021-01-01实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T XXXX—XXXX 目 次 前言 ................................ ................................ .................. I 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 4 5 总则 ................................ ................................ ............... 4 6 原理 ................................ ................................ ............... 4 7 检验器材和试剂 ................................ ................................ ..... 4 8 检验流程 ................................ ................................ ........... 5 9 数据分析 ................................ ................................ ........... 6 10 遗传参数计算 ................................ ................................ ...... 7 附录 A（资料性附录）法庭科学DNA二代测序检验记录表 ................................ .... 8 GA/T XXXX—XXXX Ⅰ 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会 法医检验 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 6）提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心 、四川大学 、广东省公安厅。 本标准主要起草人： 叶健、季安全、王乐、康克莱、侯一平、张驰、李海燕、刘开会、张广峰。 GA/T XXXX—XXXX 1 法庭科学 DNA二代测序检验规范 1 范围 本标准规定了利用二代测序技术进行法庭科学人类 DNA遗传标记靶向 测序检验的术语和定义、原 理、检验器材和试剂、检验流程，以及数据 分析、遗传参数计算应遵守的基本要求 。 本标准适用于 针对各类法医学物证检材的 STR、SNP、InDel等遗传标记以及线粒体 DNA进行二代测 序检验分析，为法庭科学实践提供遗传学信息 ，适用于所有从事法庭科学检验的 DNA实验室和产品制 造商。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 27025 —2019 检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T 30989—2014 高通量基因测序技术规程 GB/T 35537—2017 高通量基因测序结果 评价要求 GA/T 383 —2014 法庭科学 DNA实验室检验规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA测序 DNA sequencing 对DNA分子的核苷酸排列顺序的测定，即测定组成核酸分子的腺嘌呤（ A） 、鸟嘌呤（ G） 、胞嘧啶 （C）和胸腺嘧啶（ T）的排列顺序。 3.2 二代测序 second generation sequencing 区别于传统 Sanger（双脱氧法）测序， 能够一次并行对大量核酸分子进行序列测定的技术 ，通常 一次测序反应能产出不低于 100 Mb的测序数据。 3.3 靶向测序 targeted sequencing 针对特定基因集或基因组区域内已知和新型变异 进行测序，有效降低测序成本，提高 测序深度 ， 更为有效地研究特定区域的 遗传变异 。 3.4 桥式PCR bridge polymerase chain reaction GA/T XXXX—XXXX 2 文库两端的DNA序列与芯片表面固定的引物序列特异性结合， 以文库 DNA为模板， 进行桥形扩增。 通过不断 变性和扩增的循环过程使得每个 DNA片段在各自的位置上复制集中成束，生成 DNA簇。每个 DNA簇包含成千上万单克隆扩增子，以每个 DNA单链为模板， 逐个合成 DNA互补链，将碱基信号强度 放大，进而达到测序所需信号的强 度。 3.5 乳化PCR emulsion polymeras e chain reaction 将用于PCR反应的水相体系与油相体 系混合，形成大量油包水的微乳液独立 PCR反应空间，如果 PCR反应体系中加入的核酸模板数量合适，每个独立反应空间中将只有一个模板分子 。在形成的 独立 反应空间中进行相同模板的 平行扩增，即可得到大量相同的扩增结果，实现 基因扩增。 3.6 DNA纳米球 DNA nanoball 在二代测序的模板扩增过程中， 先将 DNA进行片段化处理， 加接头序列和环化， 形成单链环状 DNA， 然后通过滚环扩增将单链环状 DNA扩增2～3个数量级最终产生 的产物。 3.7 单次测序 single run sequencing 测序仪器运行一个测序流程，如一次单向测序或一次双向测序的行为。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.20] 3.8 文库 library 通过生物来源的 、人工合 成的或克隆技术等所得到的一个重建分子群，如基因组文库、互补 DNA 文库、噬菌体展示肽文库等。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.5] 3.9 接头 adapter 用于标记和固 定待测序片段的一小段已知序列 的DNA片段。 3.10 标签或条码 index; barcode 一段特征性的脱 氧核苷酸短片 段，在多样本混合检测时，充当 识别特定样本来源的唯一标志。 3.11 测序通量 throughput of gene sequencing 单次测序可获 得序列信息的基因片段数量或可测 定的脱氧 核糖核酸 和核糖核酸（以 碱基表示）数 量。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.21] 3.12 测序读长 read length of gene sequencing GA/T XXXX—XXXX 3 测序能测得的最长 DNA片段的长度，通常以碱基数表示。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.24] 3.13 测序深度 depth of sequencing 待测样本中某个指定的核苷酸被检测的次数 。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.31] 注：对于STR的二代测序， 指待测样本中某条指定的序列被检测的次数。 3.14 测序准确率 accuracy of gene sequencing 对已知序列的基因进行测序，获得的正确碱基数占可识别的碱基数比例。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.25] 3.15 碱基识别正确 率 accuracy of base calling 单次测序正确碱基数占碱基总数的比例。 [GB/T 30989 -2014，定义 3.27] 3.16 碱基识别错误率 inaccuracy of base calling 单次测序错误碱基数占碱基总数的比例，与碱基识别正确率（ 3.15）相对。 [GB/T 30989-2014，定义 3.28]