29 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中吗啡等 29种毒品 及代谢物筛选 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Screening methods for 29 drugs and metabolites including morphine in biological samples—LC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 公安部物证鉴定中心 、江苏省南京市公安局禁毒支队、 广西壮族自治区公安厅刑 事侦查总队、广东省公安厅刑事技术中心、深圳市公 安局刑警支队、重庆市公安局物证鉴定中心、上海 市公安局物证鉴定中心、中国人民公安大学、济宁市公安局刑事科学技术研究所、杭州市公安局刑事科 学技术研究所 。 本文件主要起草人： 常靖、宋歌、王瑞花、 张忠辉、 黄克建、 裴茂清、李树辉、 贺剑锋、石银涛、 梁晨、王爱华、张云峰、于忠山、 王继芬、 刘晓锋、张亮、汪蓉、 曲筱静、应剑波、洪亮 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中吗啡等 29种毒品及代谢物 筛选 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学 生物检材 (血液、尿液)中吗啡等29种毒品的液相色谱 -质谱筛选方法。 本文件适用于法庭科学 生物检材 (血液、尿液)中29种毒品的定性分析 。其他检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 、缩略语 3.1 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 LC-TQ/MS：液相色谱 -三重四极杆质谱（ liquid chromatography -triple quadrupole tandem mass spectrometry ） LC-HRMS：液相色谱 -高分辨质谱 （Liquid chromatography -high resolution mass spectrum ） 4 原理 以空白样品和 添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材 样品中29种毒品（详见 附录 A）进 行提取、 净化及浓缩， 采用液相色谱 -三重四极串联 质谱（LC-TQ/MS）和液相色谱 -高分辨质谱 (LC-HRMS ) 检测。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 5mmol/L 甲酸铵溶液 （pH值3）：称取甲酸铵 0.315g，加水溶解 后，再加入 800µL甲酸，用水GA/T× × × × —× × × × 2 定容至1000mL，混匀； d) 0.1%氨水溶液 ：准确移取 浓氨水（质量分数为 25%~28%）0.5mL，加水溶 解定容至 1000mL， 混匀。 e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准储备液：根据标准物质纯度和盐型换算后， 分别用乙腈配制 29种毒品 1.0mg/mL 标准溶液，或采用市售标准溶液 ，密封， -18℃以下保存 ，有效期 12个月； 2) 0.01mg/mL单一标准工作溶液： 准确移取29种毒品标准 储备液，分别用乙腈配制成浓度 为0.01mg/mL 单一标准工作溶液 ，密封， 0℃~4℃保存，有效期 3个月；实验中所用 其他 浓度的单一标准工作溶液均由 0.01mg/mL 标准工作溶液稀释得到 ； 3) 串联质谱 质控标准 工作溶液（10ng/mL）：准确移取 9种（吗啡、甲基苯丙胺、 甲卡西酮、 美沙酮、可卡因、四氢大麻酸、地芬诺酯、舒芬太尼、 BZP）毒品的单一标准工作溶液， 用乙腈 /水（体积比 1:1）配制成浓度为 10ng/mL 混合标准溶液， 现用现配； 4) 高分辨质谱质控标准 工作溶液（ 100ng/mL ） ：准确移取 9种（吗啡、甲基苯丙胺、 甲卡西 酮、美沙酮、可卡因、四氢大麻酸、地芬诺酯、舒芬太尼、 BZP）毒品的 单一标准工作溶 液，用乙腈 /水（体积比 1:1）配制成浓度为 100ng/mL 混合标准溶液， 现用现配。 注1：可根据实际情况， 调整质控标准溶 液中毒品的种类 和数量； 注2：四氢大麻酚和四氢大麻酸标准溶液应避光保存 。 5.2材料 材料包括 ： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管 ； c) 有机微孔滤膜： 0.22µ m； d) 固相萃取柱： Oasis® PRIME HLB柱或等效固相萃取柱。 注：Oasis®PRIME HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果 其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 液相色谱 -三重四极杆质谱 仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 液相色谱 -高分辨质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和高分辨质量分析器 ； c) 振荡器； d) 分析天平：分度值 d≤0.01mg； e) 离心机； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 样品前处理 7.1.1 固相萃取 法 GA/T× × × × —× × × × 3 移取尿液或血液等液体检材样品 0.5mL，于具盖离心管中。 加入乙腈 3mL，用振荡器振荡10min， 以不低于 8000r/min 离心 20min，取上清液转移至固相萃取柱 中，控制上清液过柱流速 低于 1.0mL/min， 收集过滤液于具塞玻璃试管中 ，置于浓缩器上 50℃浓缩至近干，残留物用乙腈/水（体积比 1:1）0.5mL 溶解，经有机微孔滤膜过滤， 作为检材样品提取液，供仪器检测。 7.1.2 沉淀蛋白法 移取尿液 或血液等液体检材样品 0.5mL，于具盖离心管中 。加入乙腈 3mL，用振荡器振荡 10min， 以不低于 8000r/min 离心 20min，收集上清液 于具塞玻璃试管中 ，置于浓缩器上 50℃浓缩至近干，残留 物用乙腈/水（体积比 1:1）0.5mL定容，经有机微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。 7.1.3 空白样品和添加样品 取与检材样品等量的相似基质空白样品 ，与检材样品平行操作， 得到空白 样品提取液， 供仪器检测。 再取与检材样品等量的相似基质空白 样品，添加标准物质溶液 （LC-TQ/MS检测时， 添加标准溶液，使 样品中可卡因、舒芬太尼 、甲基苯丙胺、 卡西酮、美沙酮、地芬诺酯 、吗啡、 BZP、四氢大麻酸 的浓度 为10ng/mL，LC-HRMS检测时，添加标准 溶液，使样品中 可卡因、舒芬太尼、甲基苯丙胺、 卡西酮、 美沙酮、地芬诺酯、吗啡、 BZP、四氢大麻 酸的浓度为 100ng/mL）作为添加样品，与检材样品平行操作， 得到添加样品提取液，供仪器检测。 注：可根据实际情况， 调整添加样品中毒品的 数量和种类。 7.2 仪器检测 7.2.1 仪器条件 7.2.1.1液相色谱 -三重四极串联质谱仪条件 以下为参考条件： a) 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS C18柱， (2.1mm× 150mm , 1.8µ m)或其他等效柱； 注： ACQUITY UPLC HSS C18为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 40℃； c) 流动相 A：乙腈； d) 流动相 B：5mmol/L 甲酸铵溶液 （对于疑似吗啡样品，宜将流动相 B更换为0.1%氨水溶液进 样分析）； e) 流速： 0.4mL/min； f) 进样体积 ：1µL~2µL； g) 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱 条件见表 1； h) 扫描方式：正负离子同时扫描； i) 检测方式：多反应监测； j) 电喷雾电压： 5500V（-4500V）； k) 离子源温度： 550℃； l)