3 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA GA/T ×××× —×××× 法庭科学 生物检材中甲基苯丙胺等 10 种毒品检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for 10 drugs including methamphetamine in biological samples—LC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T× × × × —× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本文件起草单位： 云南省公安厅禁毒局、最高人民检察院检察技术信息研究中心、玉溪市公安局刑 事科学技术研究所。 本文件主要起草人： 李虹、王朝虹、赵蒙、李绍鹏、杨发震、陈康、李继印、刘洪敏、张文竞 。 GA/T× × × × —× × × × 1 法庭科学 生物检材中甲基苯丙胺等 10种毒品检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学 生物检材(血液、尿液)中甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDA（3,4-亚甲二氧基苯丙 胺）、 MDMA（3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺）、 MBDB（N-甲基 -1-（3,4-亚甲二氧基苯基） -2-丁胺）、 MDEA（3，4-亚甲基二氧基乙 基苯丙胺）、卡西酮、甲卡西酮、 PMMA（副甲氧基甲基苯丙胺 ）、氯 胺酮等 10种毒品的液相色谱 -串联质谱（LC-MS/MS）定性定量检验方法。 本文件适用于法庭科学生物检材 (血液、尿液 )中甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDA、MDMA、MBDB、 MDEA、卡西酮、甲卡西酮、 PMMA、氯胺酮等 10种毒品的定性分析和定量分析。 其他检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对生物检材中10种毒品（化合物信息参见附录 A）进行提取、净化后， 采用液相色谱 -串联质谱法进行定性定量 ，以保留时间、质谱特征离子对和离 子对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 0.3%甲酸溶液：量取甲酸 1.5mL，加水稀释并定容至 500mL； d) 0.1mol/L 盐酸溶液： 量取浓盐酸 （分析纯， 质量分数约 37%) 0.84mL ， 加水稀释并定容至 100mL； e) 5mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸 42mL，加水稀释并定容至 100mL； f) 5%氨水溶液 (体积比为 5:95)：量取氨水（分析纯， 质量分数约 25%）5mL，加水稀释并定容至 100mL； GA/T× × × × —× × × × 2 g) 含5%氨水的甲醇溶液 (体积比为 5:95)：量取氨水 5mL，加甲醇溶解并定容至 100mL； h) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备液：根据甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDA、MDMA、MBDB、MDEA、 卡西酮、甲卡西酮、 PMMA和氯胺酮标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用 甲 醇分别配制成 1.0mg/mL 标准物质 储备液，密封， 冷冻保存，有效期 12个月。或采用市 售标准溶液； 2) 0.1mg/mL 单一标准物质工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 的甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDA、 MDMA、MBDB、MDEA、卡西酮、甲卡西酮、 PMMA和氯胺酮 标准物质溶液各 1.0mL， 用甲醇配制成浓度为 0.1m g/mL的单一标准物质工作 溶液，密封， 冷藏保存，有效期 6个 月。实验中所用其 他浓度的单一标准物质工作溶液均由 0.1mg/mL 单一标准物质工作溶液 配制得到； 3) 混合标准物质工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 的甲基苯丙胺、苯丙胺、 MDA、MDMA、 MBDB、MDEA、卡西酮、甲卡西酮、 PMMA和氯胺酮 等10种标准物质溶液各适量，用 甲醇配制成苯丙胺、 MDA和卡西酮浓度为 5µ g/mL， 甲基苯丙胺浓度为 2µ g/mL，MDMA、 MDBD、MDEA、甲卡西酮、 PMMA和氯胺酮浓度为 1µ g/mL的混合标准物质工作溶液， 密封，冷藏保存，有效期 6个月。 5.2材料 材料包括： a) 混合阳离子交换固相萃取柱或等效固相萃取柱 ； b) 具盖离心管； c) 有机系微孔滤膜： 0.22µm； d) 一次性注射器 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)和三重四极 杆质量分析器； b) 电子天平：分度值 d≤0.01mg； c) 离心机； d) 振荡器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 固相萃取 移取血液样品 0.1mL于离心管中，加入 300µ L 0.1mol/L 盐酸溶液，或移取尿 液样品 0.5mL于离心 管中，加入 50 µ L 5 mol/L 盐酸溶液酸化， 1000r/min 涡旋混匀 1min，再以不低于 8500r/min 离心 5 min， 取上清液转移至已活化好 （依次用 1mL甲醇、1mL水过柱）的固相萃取柱中，控制上清液过柱流速 在 2mL/min~3mL/min 之间， 再依次用 0.1 mol/L 盐酸溶液 1mL、 甲醇 1mL和5%氨水溶液 （体积比为 5:95） 1mL淋洗，弃去淋洗液，用含 5%氨水的甲醇溶液（体积比为 5:95）1mL洗脱，接收洗脱液， 洗脱液经 0.22µm有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。 GA/T× × × × —× × × × 3 注：检材样品的取样量可根据实际情况进行调整。 7.1.1.2质控样品制备 取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中， 一份作为空白 样品， 一份添加标准 物质工作溶液， 使目标物 浓度为 10ng/mL，作为添加样品 ，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取 液，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -串联质谱仪 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH Phenyl 柱 (2.1mm× 100mm, 1.7µ m) 或其他等效柱； 注： ACQUITY UPLC BEH Phenyl 柱为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者， 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 35℃； c) 流动相 A：乙腈； d) 流动相 B：0.3%甲酸溶液； e) 流速： 0.4mL/min ； f) 进样量： 5µ L； g) 洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1； h) 电离源：电喷雾离子源（ ESI）； i) 扫描方式：正离子扫描； j) 检测方式：多反应监测（ MRM）； k) 毛细管电压： 0.5 kV； l) 去溶剂气温度： 550℃； m) 去溶剂气流量： 800 L/h； n) 锥孔气流量： 150 L/h； o) 碰撞气流量： 0.15 mL/min ； p) 各目标物的 MRM参数参见附录 B。 表1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相A 流动相B 0.0 10% 90% 3.0 55% 45% 4.0 90% 10% 4.6 90% 10% 4.7 10% 90% 6.0 10% 90% 7.1.2.2 进样 分别吸取 空白溶剂、添加样品 提取液、空白样品 提取液、检材样品 提取液、标准物质工作溶液， 按 7.1.2 .1仪器条件 进行检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。 GA/T× × × × —× × × × 4 7.2 定量分析 7.2.1样品前处理 移取血液检材样品 0.1mL两份，或移取尿液检材样品 0.5mL两份，按 7.1.1进行操作，得到检材样品 提取液，供仪器检测。 取与检材样品等量的相似基质空白样品，