ICS 13.310 CCS A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T ××××—×××× 法庭科学 生物检材中 α-茄碱和 α-卡茄碱 检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination method s for α-solanine and α-chaconine in biological samples—LC-MS ×××× -××－××发布 ×××× -×× -××实施 中华人民共和国公安部 发 布 GA/T × × × ×—× × × × I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任 。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究院 。 本文件主要起草人： 刘伟、沈敏、卓先义、沈保华 、向平。 GA/T × × × ×—× × × × 1 法庭科学 生物检材中 α-茄碱和 α-卡茄碱检 验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学 领域生物检材（血液、尿液、肝脏）中 α-茄碱和 α-卡茄碱的液相色谱 -串联 质谱（ LC-MS/MS）定性定量方法。 本文件适用于法庭科学 领域生物检材（血液、尿液、肝脏）中 α-茄碱和 α-卡茄碱的定性定量分析。 其他检材 可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析 名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求 对生物检材进行固相萃取 ，采用液相色谱 -串联 质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征 离子对和离子对丰度 比作为定性判断依据； 以峰面积为依据， 采用外标法或内标法 进行定量 分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 -2008中规定的一级水，试剂包括： a) 甲醇（色谱纯） ； b) 甲酸（优级纯） ； c) 乙腈（色谱纯） ； d) 0.1%甲酸溶液：移取 甲酸 10mL，加水稀释并定容至 1000 mL，混匀； e) 标准物质溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质储备 溶液：根据 α-茄碱和 α-卡茄碱标准物质 的纯度换算后，各称取适 量，用甲醇分别配制成 1.0mg/mL α-茄碱和 α-卡茄碱标准物质储备 溶液。密封，置 于冰箱 中冷冻保存，有效期 12个月； 2) 单一标准物质工作溶液：移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶液，用甲醇配制成浓度为 0.1mg/mL 的单一标准工作溶液，密封， 置于冰箱中冷藏 保存，有效期 3个月。实验中所 用其他浓度的单一标准 物质工作溶液 由0.1mg/mL单一标准物质 工作溶液逐级稀释 得到； 3) 混合标准物质 工作溶液：分别 移取 1.0mg/mL 的α-茄碱和 α-卡茄碱标准物质储备溶液， 用GA/T × × × ×—× × × × 2 甲醇配制成浓度为 0.1mg/mL的混合标准物质工作溶液 ，密封， 置于冰箱中冷藏 保存，有 效期 3个月。实验中所用其他浓度的混合标准物质工作溶液 由0.1mg/mL混合标准物质工 作溶液逐级稀释得到； 4) 1.0mg/mL 内标储备 溶液：以美替诺龙醋酸酯作为内标，根据其纯度换算后，用 甲醇配制 成1.0mg/mL 内标储备 溶液，密封，置 于冰箱中冷冻保存，有效期 12个月； 5) 0.5µ g/mL内标工作溶液 ：移取 1.0mg/mL 内标储备液，用甲醇 逐级配制成 0.5µ g/mL内标 工作溶液，密封，置 于冰箱中冷藏保存，有效期 3个月。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis® HLB或等效固相萃取柱 ； 注： Oasis® HLB 柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括： a) 液相色谱 -串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ ESI）； b) 固相萃取仪； c) 电子天平：定性检验实际分度值 d≤0.1mg，定量检验实际分度值 d≤0.01mg； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 检材样品制备 7.1.1.1.1 血液、尿液样品制备 移取血液或尿液 0.2mL，加入水 1mL，混匀，不低于 13000r/min 离心 5 min，取上层清液 1mL以 约0.5 mL/min 的速度在固相萃取小柱上样（固相萃取小柱在用前依次用甲醇 1mL、水 1mL活化） 。然 后依次用 5%甲醇溶液 1 mL和水 1 mL淋洗，抽干小柱 6min，用甲醇 1mL洗脱，重复 2次，合并洗脱 液，洗脱液在浓缩器上 55℃下氮气流下浓缩至干，残留物用 200 µL甲醇复溶，得到检材样品提取液， 供仪器检测。 7.1.1.1.2 组织样品制备 称取研碎组织 0.2g，加入水 1.2mL，混匀，不低于 13000r/min 离心 5 min，余下同 7.1.1.1.1。 7.1.1.2 质控样品制备 GA/T × × × ×—× × × × 3 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份 添加 10ng/mL 的α-茄碱和 α-卡茄碱标准工作溶液 10µ L，加入水 1mL（组织样品为 1.2mL），作为添加样品 ，与检材样品平行操作，得到空 白样品提取液和添加样品提取液 ，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -串联质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 色谱柱： Restek Allure® PFP Propyl 液相色谱 柱（ 100mm2.1mm，5m）或其他等效柱； 注： Restek Allure ® PFP Propyl 柱是 Restek公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相： A相：乙腈； B相： 0.1%甲酸溶液 （体积比 为70:30）； c) 流速： 300L/min，恒流模式； d) 柱温：4℃； e) 进样量： 10L； f) 离子源：电喷雾电离 -正离子扫描（ ESI+）； g) 检测方式：多反应监测（ MRM）； h) 离子源电压 (IS)：5500V； i) 碰撞气 (CAD)、气帘气 (CUR)、雾化气 (GS1)、辅助气 2 (GS2)均为高纯氮气，使用前调节各气 流流量以使质谱灵敏度达到检测要求； j) 喷雾电压 (IS)、去簇电压 (DP)、碰撞能 量(CE)等电压值应优化至最佳灵敏度 ； k) 定性离子对、定量离子对见表 1。 表1 定性离子对、定量离子对 目标物 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z α-茄碱 868.6/398.5 868.6/398.5 868.6/722.4 α-卡茄碱 852.6/706.5 852.6/706.5 852.6/398.5 美替诺龙醋酸酯 345.4/187.4 345.4/187.4 345.4/83.1 7.1.2.2 进样 分别吸取检材样品 提取液、空白样品提取液和添加样品提取 液，按 7.1.2.1条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 移取（或称取） 检材血液 0.2m L（或尿液 0.2m L，组织 0.2g）两份，加0.5µg/mL美替诺龙醋酸酯内标 工作溶液 20µ L（外标法 不用加），再加入水 1mL（组织样品为 1.2mL），按 7.1.1.1 .1（或 7.1.1.1.2）操作， 得到检材样品提取液 ，供仪器检测 。 GA/T × × × ×—× × × × 4 另取相同基质空白 样品若干份，添加系列浓度的 α-茄碱、 α-卡茄碱或单点浓度的 α-茄碱、 α-卡茄碱， 作为添加样品 ，与检材样品平行操作 。 检材样品中 α-茄碱、 α-卡茄碱的浓度应在 工作曲线的线性范围内。配制单点浓度的 添加样品 时，检 材中 α-茄碱、 α-卡茄碱浓度需在该浓度的 （100±50）%范围内。 7.2.2