HHP ICS 13.310 CCS A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T × × × × －× × × × 法庭科学 生物检材中钩吻素甲 和 钩吻素子检验 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences —Examination methods for gelsemine and koumine in biological samples —GC-MS ×××× -××-××发布 ×××× -××-××实施 中华人民共和国公安部 发布 GA GA/T×××× —×××× I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别 专利的责任。 本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1 ）提出并归口。 本文件起草单位： 江西省公安厅刑事科学技术研究所、广东省公安厅刑事技术中心、广州市公安局 刑事技术所、济南市公安局刑事科学技术研究所 。 本文件主要起草人： 刘勇孜、曹达锋、王洪宗、裴茂清、张小婷、宋蕊 。 GA/T×××× —×××× 1 法庭科学 生物检材中钩吻素甲 和钩吻素子检验 气相色谱 -质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材（ 血液、尿液、肝组织）中钩吻素甲、钩吻素子 的气相色谱 -质谱 （GC-MS）检验方法。 本文件适用于法庭科学 生物检材 （血液、尿液、肝组织） 中钩吻素甲、钩吻素子 的定性分析和定量 分析。其他检材可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱 -质谱 法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标 法或内标法进行定量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符 合GB/T 6682 中规定的 三级水。分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括： a) 甲醇； b) 乙酸乙酯； c) 5%氢氧化钠溶液：准确称量 5.0g氢氧化钠，加水溶解 并定容至 100mL，常温密封保存，有效 期6个月； d) 2%甲醇水溶液：准确量取甲醇 2.0mL，加水稀释并定容至 100mL，常温密封保存，有效期 6 个月； e) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 单一标准物质储备溶液：根据 钩吻素甲和钩吻素子 标准物质的纯度和盐型换算 后，各称取适量， 用甲醇分别配制 1.0mg/mL 钩吻素甲和钩吻素子标准物质 储备溶液，密 封， -18℃以下保存，有效期 12个月； 2) 0.1 mg/mL 单一标准物质 工作溶液：移取 1.0mg/mL 的钩吻素甲和钩吻素子标准物质 储备 溶液，用甲醇 分别配制成 0.1mg/mL 钩吻素甲和钩吻素子 单一标准物质工作溶液，密封，GA/T×××× —×××× 2 0℃~4℃保存，有效期 6个月；实验中所用其 他浓度的单一标准 物质工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到； 3) 0.1mg/mL 混合标准物质 工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 的钩吻素甲和钩吻素子标准物质 储备溶液，用甲醇配制成 0.1mg/mL 钩吻素甲和钩吻素子混合 标准物质工作溶液，密封， 0℃~4℃保存，有效期 6个月；实验中 所用其他浓度的混合标准 物质工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质 储备溶液用甲醇稀释得到； 4) 1.0mg/mL 内标储备溶液：以士的宁作为内标，根据其纯度和盐型换算后，用甲醇配制 1.0mg/mL 内标储备溶液，密封， -18℃以下保存，有效期 12个月； 5) 0.1mg/mL内标工作 溶液： 移取 1.0mg/mL 的内标储备溶液 ，用甲醇配制成浓度为 0.1mg/mL 的内标工作溶液 ，密封， 0℃~4℃保存，有效期 6个月。实验中所用其他浓度的内标工作 溶液均由 1.0mg/mL 内标储备溶液配制得到。 5.2材料 材料包括 ： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis ® HLB柱或等效固相萃取柱 。 注：Oasis ® HLB柱是 Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备包括 ： a) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 振荡器； c) 电子天平 ：分度值 d≤0.01mg； d) 离心机； e) 移液器； f) 超声仪； g) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样 品2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 2.0g于具盖离心管中， 用5% 氢氧化钠 溶液调 pH值大于 10，加入乙酸乙酯 3.0mL，振荡 10min，不低于 5000 r/min离心 10min，分 离有机相 ；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 50℃浓缩至干，残留物用 甲醇 200µ L 溶解，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量、溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.2 固相萃取 GA/T×××× —×××× 3 移取血液等液体检材样品 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 2.0g于具盖离心管中 ，加入 2%的甲醇水溶液 6mL，混匀、振荡 10min，不低于 5000 r/min离心 10min，取上清液转移至已活化好的 固相萃取柱中（使用前依次用甲醇、水进行活化），上清液过柱流速不超过 0.5mL/min，用水4mL淋 洗，用乙酸乙酯 6mL洗脱，洗脱液过柱流速不超过 0.5mL/min，收集洗脱液，置于浓缩器上 50℃浓缩 至干，残留物用 甲醇 200µ L溶解，作为检材样品提取液，供仪器检测。 注：检材样品取样量 和定容体积可根据实际情况调整。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用 血液替代）两份于具 盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加标准物质工作溶液，使钩吻素甲、钩吻素子浓度为 1µ g/mL(g) ，作为添加样品， 与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 气相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件： a) 色谱柱： DB-5MS毛细管色谱柱 (30m ×0.32mm×0.25 µm)或其他等效柱； 注： DB-5MS毛细管色谱柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则 可使用这些等效产品。 b) 色谱柱升温程序： 100℃保持 1min，以 10℃/min 速率升温至 200℃，保持 1min，再以 20℃/min 速率升温至 280℃，保持 14min； c) 进样口温度： 280℃； d) 传输线温度： 260℃； e) 载气：高纯氦气； f) 电子轰击能量： 70eV； g) 离子源温度： 250℃； h) 扫描方式：全扫描（ Scan）或选择离子监测（ SIM）； i) 溶剂延迟： 3min； j) 柱流量： 1.5mL/min ； k) 进样方式：分流进样； l) 分流比： 5:1； m) 质量范围： 40amu～450amu； n) 定性定量离子：钩吻素甲（ m/z，108*、322、279、120），钩吻素子（ m/z，306*、70、120、 223），士的宁（ m/z，334*、120、162、77）。 注：带*号离子为定量离子。 7.1.2.2 进样 分别吸取空白溶剂、添加样品提取液、空白样品提取液、检材样品提取液、标准物质工作溶液，按 7.1.2.1仪器条件进行检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。 7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 移取血液等液体检材样品 2.0mL两份，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 2.0g两份，按 7.1.1进行操 作，得到检材样品提取液，供仪器检测。 取与检材样品等量的相似基质空白样品， 与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液， 供仪器检测。 GA/T×××× —×××× 4 单点校正法 ：取与检材样品等量的相似基质空白样品两份，添加钩吻素甲、钩吻素子