ICS13.300;11.100 A80 中华人民共和国国家标准 GB/T 35521—2017 化学品 胚胎毒性 植入后大鼠全胚胎培养法 ChemicalsEmbryotoxicityPost-implantation embryo culture test 2018-07-01实施 2017-12-29发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 35521—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、宁波出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：李海山、崔媛、韩辉、陈会明、陈小青、程艳、艾文超、谢文平。 GB/T 35521—2017 化学品胚胎毒性 植入后大鼠全胚胎培养法 1范围 本标准规定了植人后天鼠全胚胎培养方法检测化学品胚胎毒性的术语和定义、试验原理、试验方 法、终点描述、质量控制、数据分析和评价。 本标准适用于应用植人后大鼠全胚胎培养法检测化学品的胚胎毒性。本标准也可作为药物、消费 品、农业用化学品、食品添加剂和污染物胚胎毒性检测的参考方法。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 半数致畸浓度IC50 formalformations IC5o 50%的胚胎出现畸形的受试物浓度。 2.2 3T3细胞半数生长抑制浓度IC5oforinhibitionofthegrowthof3T3cells IC50(3T3) 50%的3T3细胞生长受抑制的受试物浓度。 2.3 最大致畸浓度ICmaxformalformations ICmax 最大比率出现畸形的受试物最低浓度。 2.4 总体形态学评分无效应浓度ICnoecfortotalmorphological score ICNOEC TMS 对总体形态学评分未见异常效应的最高浓度。 3试验原理 含有1个～5个体节的大鼠胚胎在48h培养后，其生长发育和形态分化与体内同龄胚胎相似，且此 时期的胚胎处于器官形成期，对外源化学物敏感。转瓶培养有利于胚胎培养液与其上方的气体交换 由于胚胎发育对于氧气的需要越来越天，气体交换对于培养液的最佳氧饱和度非常重要。测试完成后， 评估胚胎的形态，将对照组和实验组的胚胎进行比较，得到受试物胚胎毒性结果。 4试验方法 4.1仪器设备 使用设备和器具如下： 1 GB/T35521—2017 体视显微镜； 一 一镊子； 一手术剪； 一移液器； 培养皿：直径约100mm； 带旋转设备的37℃培养箱（宜内带观察显微镜）； 旋转培养瓶：容量至少10mL。 4.2试剂和材料 4.2.1大鼠 4.2.1.1用0.03mg/L、0.1mg/L0.3mg/L和1mg/L的5-氟尿嘧啶进行阳性对照实验，1000mg/L 的青霉素G钠进行阴性对照实验，通过了阳性和阴性对照化合物的质量检查，并且有足够胚胎数自的 大鼠品系可用于本标准。 4.2.1.2大鼠在温度20℃~24℃，湿度50%～70%的SPF级动物房中饲养，自由进食，不限饮水。 4.2.1.3每天检查大鼠的一般行为，保持其健康。7周龄～10周龄、未经产雌鼠至少适应2周后，与至 少10周龄的雄鼠交配。用于制备血清的雄鼠体重应不低于250g。 4.2.2化合物和培养液 使用的化合物和培养液如下： Hanks平衡盐溶液(HBSS):含0.185g/L的CaCl2，8.0g/L的NaCl,0.4g/L的KCl,0.2g/L的 MgSO，0.308g/L的NaHCO:，1.0g/L的葡萄糖，0.075g/L的NazHPO4，0.060g/L的 KH,PO，6℃保存，以上试剂均为分析纯； 一二甲基亚矾（DMSO,分析纯）； 一乙醇（分析纯）； 一二氧化碳（CO2，工业级）； —5-氟尿嘧啶； 一青霉素G钠； 无菌真空采血管。 4.2.3血清制备 雄性大鼠采用CO2麻醉后，打开腹腔，找到主动脉，用无菌真空采血管从主动脉收集血液，在1min 之内完成。1800r/min离心5min后吸取血清于冰上保存。采集完所有样品后，再次于1800r/min 4.3 测试过程 4.3.1交配过程 雌性大鼠饲养在12h/12h明暗交替的环境中，上午6时至下午6时为暗。下午4时至6时，将发 情的未经产的雌鼠与雄鼠合笼，次日清晨分笼 4.3.2分离胚胎 妊娠第10天上午（合笼当天为第0天），CO，麻醉致死，腹腔壁切口分离子宫，转移至手术板。用无 菌的镊子和剪刀从子宫里分离蜕膜上的胚胎。把独立的胚胎转移到含有无菌HBSS的培养皿中，在显 2