ICS 11.020 SN C 62 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5099—2019 国境口岸亨德拉病毒实时荧光 RT-PCR检测方法 Detection method for Hendra Virus by real-time fluorescence RT-PCR at 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5099—2019 前言 本标准根据GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、新疆国际旅行卫生保健中心、深圳市检验检疫科学研 究院、中华人民共和国广州海关。 本标准主要起草人：马雪征、杨烨、林燕如、张丽萍、胡孔新、史蕾、孙肖红。 业标准信息服务平台 SN/T5099—2019 国境口岸亨德拉病毒实时荧光 RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸亨德拉病毒检测的生物安全要求、标本的采集、运输和保存、标本的处理，亨 德拉病毒实时荧光RT-PCR检测方法 本标准适用于国境口岸人出境人员携带亨德拉病毒的核酸检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用 WS233病原微生物实验室生物安全通用准则 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定（原中华人民共和国卫生部令第 45号） 人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构管理办法（原中华人民共和国卫生部） 人间传染的病原微生物名录（原中华人民共和国卫生部） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 亨德拉病毒（Hendravirus，Hev） 亨德拉病毒属于亨德拉尼帕属（Henipauirus），是副粘病毒科（Paramyrouiridae）的一个新病毒类 别。亨德拉病毒是一种人畜共患病病毒，于1994年在澳大利亚昆士兰州布里斯班郊区的亨德拉首次被 发现，能引起严重的呼吸道疾病。到目前为止HeV感染的人类病例均是与感染马匹有密切接触的人， 因此密切接触是HeV的传播途径之一。HeV病毒造成的疾病的典型特征是严重的呼吸困难和高死亡 率，还表现为人接触性感染。人感染后发病初期有显著的呼吸道症状，伴有发热和肌痛；有的出现神经 症状，常表现中度脑炎。 3.2 实时荧光RT-PCRreal-timefluorescenceRT-PCR 实时荧光RT-PCR方法是在常规RT-PCR的基础上，加人一条特异性的实时荧光探针。该探针为 一段寡核苷酸，两端分别标记一个报告基团和一个萍灭实时荧光基团。探针完整时，报告基团发射的实 时荧光信号被淬灭基团吸收：PCR扩增时，利用Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告实 荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数，用Ct值表示。 1 SN/T 5099—2019 3.3 Ct 值 Ct值是每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DEPC：焦碳酸乙二酯（diethylpyrocarbonate） FAM:6-羧基-荧光素（6-carboxy-fluorescein） BHQl：黑洞淬灭基团（blackholequencherl） 5检测对象 出人境口岸发现的可疑病例。 65 实验室生物安全和PCR防污染要求 为准 按照GB19489、《人间传染的病原微生物名录》和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或 样本运输管理规定》的要求，相关材料的生物安全要求如下： 亨德拉病毒危害程度分类为第一类； 个人防护遵循GB19489； 实验室应遵循GB19489和WS233.未经培养的感染性材料的操作应在生物安全Ⅲ级（BSL-3 或ABSL-3)实验室内进行，灭活材料在生物安全II级（BSL-2)实验室内进行； 亨德拉病毒感染性材料运输包装分类为A类，UN编号为UN2814； 使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理； 疑似亨德拉病毒材料的包装及转运应符合原中华人民共和国卫生部第45号令； PCR防污染措施按照WS/T230的规定执行。 准信息服务平台 7仪器 本标准使用的主要仪器如下： 实时荧光PCR仪； 超净工作台； 二级生物安全柜； 高压灭菌锅； 低温高速离心机：最大离心力20000g； 漩涡振荡器； 冰箱：4℃、-20℃和-70℃； 移液器：10μL、20μL、100μL、200uL和1mL； 恒温水浴锅； 无菌注射器。 2